NEFROLOGIA. Vol. XIV. Núm. 1. 1994 Hipertrofia gingival por ciclosporina: Estudio de los efectos del suero de los pacientes tratados con ciclosporina-A sobre los fibroblastos humanos in vitro J. Aubia, M. Nàcher, M. Mir, J. Puig Marí, A. Oliveras, J. Lloveras y J. Masramón Servicio Nefrología. Hospital I'Esperança. Institut Municipal Investigació Mèdica (IMIM). Departamento Medicina. Universitat Autònoma. Barcelona. RESUMEN Uno de los efectos secundarios al tratamiento con ciclosporina-A (CsA) es la hipertrofia gingival, que consiste en una hiperplasia debida a la proliferación de fibroblastos de la encía y una fibrosis como consecuencia del aumento de la matriz extracelular. Para examinar los efectos de la CsA a nivel celular hemos estudiado la influencia de la droga, así como de los sueros de pacientes tratados con dicho inmunosupresor sobre la proliferación de fibroblastos in vitro. Los resultados se expresaron como Indice/40, que representa las veces que el suero problema estimula la captación de timidina respecto al suero normal cuando las células se incuban con un 40 % de suero. La CsA a concentraciones entre 1.200 y 4.800ug/ml inhibió la proliferación de los fibroblastos. Para un grupo de 15 pacientes con patologías renales diversas (IR), el Indice/40 fue de 1,04 F 0,l y de 0,90 + 0,14 después de 48 y 96 horas de incubación respectivamente. Para un grupo de 23 pacientes tratados con CsA, el Indice/40 fue de 0,89 f 0,15 (p < 0,05) y de 0,77f 0,35 (p < 0,05) después de 48 y 96 horas de incubación, respectivamente. No se observaron diferencias en cuanto a estimulación fibroblástica entre /os grupos con diferente grado de hipertrofia gingival y tampoco se e n c o n t r ó correlación entre los niveles sanguíneos de CsA y la proliferación fibroblástica. Se concluye que el suero de pacientes tratados con CsA induce un efecto inhibitorio sobre la proliferación celular mayor que el inducido por este inmunosupresor a las mismas concentraciones que las presentes en el suero, por lo que se deben buscar otros factores que puedan justificar la inhibición encontrada. Palabras clave: Cultivo de fibroblasfos. Hipertrofia gingival. Ciclosporina-A. Recibido: 8-II-93. En versión definitiva: 7-VII-93. Aceptado: 9-VII-93. Correspondencia: Dr. J. Aubia. Servei Nefrologia Hospital de I'Esperança. S. Josep de la Muntanya, 12. 08024 Barcelona. 101 J. AUBIA y cols. GINGIVAL HYPERTROPHY AND CYCLOSPORIN. EFFECT OF SERA FROM T R E A T E D PATIENTS ON FIBROBLAST PROLIFERATION SUMMARY One of the secondary effects of Cyclosporin-A (CsA) treatment is gingival hypertrophy. This lesion consists of a hyperplasia due to fibroblast proliferation of gingival c o n n e c t i v e tissue and to fibrosis as a consequence of an increase of the extracellular matrix. To examine the CSA effects at cell level we have studied the influente of the drug as well as that of the sera from patients treated with this immunosupressor, on fibroblast proliferation in vitro. The results were expressed as Index/40 representing the times that the problem serum stimulates the thymidine uptake versus the normal serum when cells are incubated with 40 % of sera. CsA concentrations between 7,200 and 4,800 ug/m/ inhibited fibroblast proliferation. For a 15 patient group with variou renal pathologies (IR) the Index/40 was 1.04 f 0.1 and 0.90 f 0.14 after 48 and 96 incubation hours respectively. For 23 CsA treated patient (CsA) the Index/40 was 0.89 f 0.75 (p < 0.05) and 0.77+ 0.35 (p < 0 , 0 5 )after 48 and 96 incubation hours respectively. No differences were observed in fibroblast stimulation in the groups with different grade5 of gingival hypertrophy and no correlation was found in the CsA levels and fibroblast proliferation. We conclude that the sera from the CsA treated patients induce a higher inhibitory effect on cellular proliferation than that induced by this immunosupressor at the same concentrations as the ones present in the sera. Conseq u e n t l y , other factors that could explain the inhibition we observed should be investigated. Key words: Fibroblast culture. Gingival hypertrophy. Cyclosporin-A. Introducción Uno de los efectos adversos de la utilización de la ciclosporina-A (CsA) es la hipertrofia gingival (HG) que aparece en grados de diversa intensidad en una proporción variable de los pacientes trasplantados renales que reciben CsA de forma crónica 1 , 2 , que puede llegar hasta el 70 % de los mismos. Existe una cantidad limitada de estudios sobre la fisiopatología de este fenómeno y, por tanto, su mecanismo exacto no está establecido. La lesión consiste básicamente en la fibroplasia del tejido conectivo de la encía por la proliferación de fibroblastos (hiperplasia) y por el aumento de la matriz (fibrosis). Esta última puede ser consecuencia a su vez de una síntesis celular exagerada de estas sustancias o bien ser debida a una inhibición de los procesos fisiológicos de degradación que también son realizados por los fibroblastos. Esta patología gingival no solamente produce un problema estético más o menos importante sino que en algunos casos llega a provocar graves problemas funcionales en la masticación. En nuestra experiencia este problema ha comportado que algunos pacientes hayan intentado abandonar la medicación inmunosupresora. En un porcentaje importante de estos pacientes se ha debido recurrir a la cirugía correctora, y además recientemente se ha demostrado que puede ser una lesión potencialmente cancerígena3 por tanto, 102 el conocimiento de su fisiopatología tiene un interés evidente. En los meses recientes hemos desarrollado un método de cultivo de fibroblastos humanos, sobre el que hemos desarrollado métodos de medida para ver la capacidad de diversos sueros de inducir respuestas proliferativas sobre estos cultivos de fibroblastos y sobre las otras funciones celulares. Algunos de los sueros que hemos podido estudiar eran de pacientes trasplantados renales que estaban en tratamiento con CsA, y, por tanto, esto nos ha permitido observar esta respuesta como una fórmula original para avanzar en el estudio de la fisiopatología de la hipertrofia gingival secundaria a la CsA. Hasta ahora se habían publicado algunos trabajos que han estudiado la capacidad de inducir proliferación en los cultivos, pero utilizando la CsA directamente sobre el cultivo, y con resultados muy divergentes, cuando no contradictorios, entre sí 4, 5. Nosotros hemos creído que en la fisiopatología de este trastorno la CsA no debe actuar aisladamente, sino en relación con otros factores (metabolitos intermedios, citoquinas efectoras, etc.), y por ello decidimos estudiar si los efectos de la CsA podían observarse investigando la influencia de los sueros de los pacientes bajo tratamiento con CsA, en los cuales existen diversos factores de crecimiento capaces de influir sobre la mitogenicidad del fibroblasto, que a su vez podrían estar alterados por los efectos de la CsA o por sus metabolitos. Pre- HIPERTROFIA GINGIVAL POR CICLOSPORINA sentamos a continuación los resultados de este modelo experimental. Material y métodos Veintiún pacientes trasplantados renales y dos pacientes con nefropatías glomerulares que estaban en tratamiento con CsA entraron en el estudio. Se obtenían 10 cc de sangre de los pacientes cuando acudían al laboratorio para su analítica de rutina y el suero se congelaba después de centrifugar hasta su utilización en el cultivo celular. La edad media de los pacientes era de 43,1 años (28-61). De ellos, nueve (37 %) tenían una hipertrofia gingival muy evidente (> un tercio de la corona) y con repercusión funcional en la masticación (grado 3 de McGaw 6 ) ; en 10 casos, las encías se consideraron normales o con una hinchazón simple del borde gingival (grado 1). En los cuatro casos restantes era apreciable una hipertrofia, pero de intensidad moderada y sin repercusión funcional (