NEFROLOGIA. Vol. XV. Núm. 1, 1995 Análisis de la infiltración intraglomerular de leucocitos y actividad de la lesión glomerular en las glomerulonefritis proliferativas P. Arrizabalaga, A. Darnell, E. Mirapeix, A. Torras y L. Revert Servicio de Nefrología, Hospital Clínic. Departamento de Medicina. Universidad de Barcelona. RESUMEN Los linfocitos T y los macrófagos intraglomerulares son detectados en las glomerulonefritis (GN) humanas, pero se desconoce su secuencia de aparición, como está demostrado en modelos experimentales. Hemos identificado la infiltración intraglomerular de células inmunocompetentes con anticuerpos monoclonales (AM) dirigidos contra el antígeno común de los leucocitos (CD45), linfocitos T (CD3), subpoblación colaboradora/inductora (CD4), supresora/citotóxica (CD8) y monocitos-macrófagos (CD14) mediante avidina-biotina-peroxidasa en 29 GN proliferativas (13 GN endocapilar, 16 GN extracapilar). Hemos analizado la posible relación entre el número total de células+ identificado con cada AM/número total de glomérulos y el índice de actividad definido como: número total de polimorfonucleares intraglomerulares/número total de glomérulos (PMN/g) y como número de glomérulos con proliferación extracapilar celular en más del 50 % del espacio de Bowman/número total de glomérulos (PEC/g). Los linfocitos T fueron más numerosos en las biopsias examinadas durante el primer mes desde el inicio de la clínica renal que en las biopsias más tardías. Los leucocitos, linfocitos T, subpoblaciones T y macrófagos fueron mucho más numerosos en las biopsias con 3 PMN/g (CD4+, p < 0,03) o con > 0,3 PEC/g (CD45+, p < 0,0003) que en las biopsias con < 3 PMN/g o con < 0,3 PEC/g. Nuestros resultados sugieren la posible relación entre la intensidad de la infiltración intraglomerular de linfocitos T y el carácter reciente de la biopsia renal. La contribución de macrófagos y de linfocitos T y éstos con el fenotipo CD4+ a la hipercelularidad glomerular apoya el papel de la inmunidad celular en las GN proliferativas. Palabras clave: Leucocitos intraglomerulares. Glomerulonefritis proliferativas. Inmunidad celular. Recibido: 30-V-94 En versión definitiva: 28-X-94 Aceptado: 31-X-94 Correspondencia: Dra. D.a P. Arrizabalaga Servicio de Nefrología Hospital Clínic Villarroel, 170 08036 Barcelona 34 INFILTRADO GLOMERULAR EN GN PROLIFERATIVAS INTRAGLOMERULAR LEUCOCYTES AND GLOMERULAR LESION ACTIVITY IN PROLIFERATIVE GLOMERULONEPHRITIS SUMMARY T cells and macrophages contribute to glomerular hipercellularity in glomerulonephritis (GN), but their sequential intraglomerular appearance as has been shown in experimental GN, has not been studied. We have identified glomerular immunocompetent cells by avidin-biotin-peroxidase technique using monoclonal antibodies (Mo Abs) for all leucocytes (CD45), all T cells (CD3), helper/inducer T cells (CD4), cytotoxic/suppressor T cells (CD8) and macrophages (CD14) in 29 renal biopsies from patients with proliferative GN (13 with endocapillary GN, 16 with extracapillary GN). The number of positive cells for each Mo Ab was counted in all glomeruli. Their relationship with the total number of intraglomerular polymorphonuclears/total number of glomeruli (PMN/g) index and with the total number of glomeruli with cellular crescents in more than 50 % Bowman's space/total number of glomeruli (Cel.C/g) index, was analyzed. T cells were more numerous in biopsies with endo- (n = 11, p < 0,05) and extracapillary (n = 17) proliferation studied soon ofter clinical onset than in biopsies studies later. Leucocytes, T cells, T cell subsets, and macrophages were more numerous in biopsies with 3 PMN/g or 0.3 Cel. C/g than in biopsies with < 3 PMN/g or < 0.3 Cel.C/g; the difference w a s significant for CD4+ T cells (p < 0.001 for 3 PMN/g, p < 0.05 for 0 . 3 Cel.C/g). This suggests an association between the intensity of glomerular T cell infiltrate and early stage of the disease. The presence of macrophages, T cells and CD4+ T cells in glomeruli with a high glomerular lesion activity index, supports the role of cellular immunity in proliferative GN. K e y words: Intraglomerular leucocytes. Proliferative glomerulonephritis. Cellular immunity. INTRODUCCION La denominada inmunidad celular, que comprende las interacciones entre linfocitos T y macrófagos, interviene en la producción de las lesiones glomerulares en las glomerulonefritis (GN) experimentales. L o s macrófagos contribuyen a la proteinuria en la GN aguda inducida por complejos inmunes circulantes 1-3 y son responsables de la misma en la fase autóloga de la GN aguda inducida por anticuerpos antim e m b r a n a basal glomerular (MBG) 3 , 4 . En la GN aguda inducida por inmunocomplejos circulantes 5, y en la GN aguda inducida por anticuerpos anti-MBG en animales previamente sensibilizados 6, la infiltrac i ó n intraglomerular de monocitos-macrófagos es precedida por la infiltración de linfocitos T. La presencia y el número de linfocitos T intraglomerulares se correlacionan con la actividad de una linfoquina capaz de inhibir la migración del macrófago 7, 8, lo que favorece su acúmulo intraglomerular. En las GN humanas, los linfocitos T y los monocitos-macrófagos contribuyen a la hipercelularidad glo- merular que caracteriza las formas proliferativas 9-12, pero se desconoce su secuencia de aparición. Este trabajo intenta conocer la posible relación entre la infiltración intraglomerular de linfocitos T y de macrófagos y el carácter reciente o activo de las lesiones glomerulares. MATERIAL Y METODOS Pacientes Se han estudiado 29 biopsias de GN proliferativa seleccionadas por la presencia de cuatro o más glomérulos, la presencia de proliferación endocapilar o/y la presencia de proliferación extracapilar en por lo menos el 20 % de los glomérulos y la disponibilidad de material suficiente para la aplicación de antic u e r p o s monoclonales (AM). Seis biopsias renales normales, obtenidas con fines diagnósticos, fueron el control tisular. Las biopsias fueron procesadas para m i c r o s c o p i a óptica e inmunofluorescencia directa 35 P. ARRIZABALAGA y cols. convencionales. Las características clínicas e histológicas de los pacientes con GN proliferativa endocapilar y con GN proliferativa extracapilar están recogidas en las tablas I y II, respectivamente. Ocho pacientes (núms. 1-8) fueron diagnosticados de GN aguda post i n f e c c i o s a . Cinco pacientes (núms. 9-13) con una GN proliferativa endocapilar difusa eran portadores de una nefropatía lúpica del tipo IV de la clasificación de la OMS. Cinco pacientes (núms. 14-18) con inmunofluorescencia lineal en los capilares glomerulares y títulos de anticuerpos anti-MBG séricos 13 entre 32 y 60% eran portadores de una GN rápidamente progresiva (RP) de clase I 14; tres de ellos (núms. 16-18), con hemorragia pulmonar, fueron diagnosticados de síndrome de Goodpasture. Cinco pacientes con inmunofluorescencia granular en los capilares glomerulares presentaban una GNRP de clase II: idiopática en dos casos (núms. 19, 20), junto a púrpura de SchönleinHenoch en otros dos (núms. 21, 22) y nefropatía por IgA en un caso (núm. 23). Cuatro pacientes sin depósitos inmunes (núms. 24-27) glomerulares eran portadores de una GNRP de clase III, asociada a anticuerpos citoplasmáticos antineutrófilo positivos 15 en un caso (núm. 25). Semilunas epiteliales acompañaban a u n a GN necrotizante focal en dos pacientes (núms. 28, 29). Procedimiento inmunohistoquímico L a s secciones de tejido renal fueron procesadas para AM con la técnica de avidina-biotina-peroxidasa referida previamente 12. Se utilizaron AM dirigidos contra el antígeno común de los leucocitos (CD45, 200 KD, 72-5-D3) 16, linfocitos T (CD3, 22 KD, Leu4 ) (Becton Dickinson, Mountain View, California, USA), subpoblación colaboradora/inductora (CD4, 55 KD, Leu-3a), subpoblación citotóxica/supresora ( C D 8 , 33 KD, Leu-2a) y monocitos-macrófagos (CD14, 50 KD, Cris-6) 17. Se utilizaron secciones de amígdala palatina como control positivo y secciones de cada muestra renal procesadas de la forma descrita con ascitis de mieloma NS1 o PBS, pero sin AM, como control negativo. Las secciones se analizaron en un microscopio Leitz a 250 aumentos . Evaluación El carácter reciente o activo de las lesiones proliferativas glomerulares fue evaluado mediante la identificación de polimorfonucleares y de semilunas epitel i a l e s celulares identificadas con técnicas histoquímicas. Los polimorfonucleares (PMN) intraglomerulares (fig. 1a) fueron contados en todos los glomér u l o s , calculándose el índice: número total de P M N / n ú m e r o total de glomérulos (PMN/g). En las GN proliferativas extracapilares hemos distinguido las semilunas celulares, fibrocelulares y fibrosas, calculándose el índice: número de glomérulos con prol i f e r a c i ó n celular en más del 50 % del espacio de Bowman/número total de glomérulos (PEC/g). En base a nuestra observación, distinguimos dos grupos de biopsias según un índice 23 PMN/g o un índice < 3 P M N / g y otros dos grupos según un índice 0 , 3 PEC/g o un índice < 0,3 PEC/g. Las células positivas identificadas simultáneamente con cada AM fueron contadas en todos los glómeru- Tabla I. Características clínicas e histológicas de los pacientes con GN proliferativa endocapilar Paciente1 Edad/ Sexo Intervalo2 Creatinina (mg/dl) Proteinuria (g/d) Hematuria Mac Mic Microscopia óptica3 Glo PMN Ig Inmunofluorescencia4 Co F 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 1. 2. 3. 4. 12/V 56/V 32/V 10/V 62/M 16/V 59/V 56/V 34/M 23/M 39/M 66/M 33/M 5 0,75 0,5 2 1 0,5 1 4 2 36 2 4 1 1,2 1,4 2,3 0,8 1 6 2,5 4,5 1,2 3 0,8 2,1 1,2 3,2 11 1 3 0,3 3 2 14 4 2,4 5 7 6 + + + + -- + + - + + + + + + + + + + + + + 12 10 5 24 13 8 5 11 10 5 5 14 6 18 240 130 18 19 80 21 50 34 3 7 12 28 ­ GC§ GC GC GC M§ GC GCM GC GC GCM GCM GC GC GC GC GCM GC GCM GC GCM GC GC ­ ­ ­ ­ ­ ­ ­ + ­ + + + ­ Paciente: 1-8 = GN aguda postinfecciosa; 9-13 = GN lúpica tipo IV. Meses entre el inicio de la clínica renal y la biopsia. Glo = número total de glomérulos; PMN = número total de polimorfonucleares intraglomerulares Depósitos de Ig = inmunoglobulinas; Co = complemento; F = fibrinógeno; § G = grarular; C = capilar; M = mesangial. 36 INFILTRADO GLOMERULAR EN GN PROLIFERATIVAS Tabla II. Características clínicas e histológicas de los pacientes con GN proliferativa extracapilar Paciente1 Edad/ Sexo Intervalo2 Creatinina (mg/dl) Proteinuria (g/d) Hematuria Mac Mic Glo Microscopia óptica3 PE PEC PMN Inmunofluorescencia4 Ig Co F 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 1. 2. 3. 75/M 59/M 20/M 23/V 19/M 29/M 77/M 12/V 23/V 40/M 74/V 69/V 78/V 66/V 75/V 30/V 1 0,75 0,5 0,75 0,5 3 2 24 0,5 6 1 1,5 1,5 1 1 3 14 17 0,6 12 10 4,2 10 1,3 1,4 8 10 10 3,9 9,5 6,3 7,4 1 2 1 3 2 4 3 6,5 3,4 2 4 Anuria 4 3 0,6 2 ­ + ­ + ­ + + + + ­ + _ + ­ ­ + + + + + ­t + + + + + Anuria 1 + + + 7 5 4 14 13 13 10 10 8 16 6 12 4 13 16 6 5 5 4 14 11 7 5 8 3 7 5 6 2 7 3 1 3 4 4 13 11 5 3 2 0 3 0 5 0 6 1 1 78 26 1 101 39 8 22 35 10 54 11 54 8 66 12 6 LC§ LC LC LC LC GC§ GC GC M§ GCM ­ ­ ­ ­ ­ - LC L,C LC LC LC GC GC GC GC GC ­ ­ _ ­ ­ - + + + + + + + ­ ­ + + + - 4. Paciente: 14-18 = GN rápidamente progresiva (RP) de clase 1; 19-22 = GNRP de clase II; 23-27 = GNRP de clase III; 28-29 = GN necrotizante. Meses entre el inicio de la clínica renal y la biopsia. Glo = número total de glomérulos; PE = número de glomérulos con proliferación extracapilar; PEC = nº de glomérulos con proliferación extracapilar celular en más del 50 % del espacio de Bowman; PMN = número total de polimorfonucleares intraglomerulares. Depósitos de Ig = inmunoglobuiinas; Co = complemento; F = fibrinógeno; § L = lineal; G = granular; C = capilar; M = mesangial. F i g . 1.­a) Polimorfonucleares intraglomerulares (flechas). Hematoxilina-eosina (X 250). b) Infiltración intraglomerular (flechas) e intersticial de linfocitos T (CD3+). c) Infiltración intraglomerular (flechas) de monocitos-macrófagos (CD14+). Avidinabiotina-peroxidasa (X 250). los, ya se localizasen en el flóculo (figs. 1b, 1c) y/o en la semiluna epitelial (fig. 1c). Las células periglomerulares positivas fueron cuidadosamente excluidas del contaje. Se determinó el número de células positivas por glomérulo. Análisis estadístico Los resultados expresados como media ± desviación estándar se analizaron con la prueba no paramétrica de la U de Mann-Whitney. 37 P. ARRIZABALAGA y cols. RESULTADOS Análisis histológico de la actividad de las lesiones glomerulares La tabla III recoge el índice de polimorfonucleares intraglomerulares (PMN/g) y el índice de proliferación epitelial celular en más del 50 % del espacio de Bowman (PEC/g) en cada biopsia. El índice PMN/g fue 7,05 ± 7,97 (x ± DS) en las 15 biopsias examinadas durante el primer mes desde el inicio de la clínica renal, y 2,15 + 1,44 (U = 56,5, p < 0,03) en las 14 biopsias examinadas más tarde. Se detectaron PMN en las GN endocapilares (6,6 ± 9 , n = 12) y en las GN extracapilares (3,36 ± 2,8, n = 17). En las GN extracapilares, el índice PEC/g fue 0,49 ± 0,4 en las 9 biopsias examinadas durante el primer mes desde el c o m i e n z o de la clínica renal y 0,24 ± 0 , 1 3 en las biopsias examinadas más tarde. Análisis inmunohistológico de la infiltración intraglomerular de leucocitos En el tejido renal normal no observamos células positivas intraglomerulares con ningún AM. Los índices de células CD45, CD3, CD4, CD8 y CD14 intraglomerulares en las biopsias de GN están recogidos en la tabla III. El índice intraglomerular de células T (CD3+) y de macrófagos (CD14+) fue 1,8 ± 2,5 (n = 14) y 2,6 ± 2,4 (n = 15) respectivamente en las biopsias examinadas durante el primer mes; y 0,8 ± 1,07 (n = 12) y 2,9 ± 3,1 (n = 14), respectivamente, en las biopsias examinadas más tarde. La celularidad intraglomerular CD45, CD3, CD4 y CD14 positiva no apareció asociada al tipo de proliferación endo- o extracapilar, pero el índice de células citotóxicas/supresoras (CD8+) fue mayor en las GN extracapilares (1,23 ± 2,92, n = 13) que en las GN endocapilares (0,59 ± 0,96, n = 10). Tabla III. Indices de polimorfonucleares, proliferación extracapilar celular y leucocitos intraglomerulares identificados con anticuerpos monoclonales Paciente Microscopia óptica1 PMN/g 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 1 Inmunohistoquímica2 CD45+/g 4,2 27,75 6 1 6,42 4,2 3,4 0,2 5,5 1,8 5 4,4 1 19,25 8,5 NC 17 9 18 8,11 1,2 3 3,3 1 7,5 1 NC 4,66 1 CD3+/g 3,75 0,5 7,33 0,6 0,57 nc 0,7 0 0 0,33 1 0 0 4,4 3,5 0,3 0,46 6,3 0,35 1,85 0,3 0,62 1 0 1 NC 0,3 0,57 NC CD4+/g 0 1 NC§ 0 0 NC§ NC§ 0 NC§ 3,66 2 0,25 NC§ 14 6 0,1 NC§ 4,3 0,5 0,5 NC§ 1,16 3,2 0 2,2 NC§ 0,1 0 NC§ CD8+/g 0,6 1 3 0 0 NC§ NC§ 0 0 0 0,45 0,33 NC§ 11 2,5 0,1 NC§ 0,2 0 2 NC§ 0,26 1 0 0 0 0 0,2 NC§ CD14+/g 3 4 4,33 2,87 0,62 2,37 0,8 2,8 0 33 2 3,92 3,2 1,16 6,5 6,5 1,5 7 12,2 1,55 0,14 2,3 3,6 0 5,6 0 0,04 1,6 0,06 PEC/g 0 0 0 0 0 0 0 0,27 0 0 0 0 0 0,42 0,8 1 0,86 0,84 0,38 0,3 0,2 0 0,18 0 0,42 0 0,46 0,06 0,16 1,5 24 26 0,75 1,46 10 4 4,5 3,4 0,6 1,4 0,85 4,7 11,1 5,3 0,25 7,2 3 0,6 2,2 3,5 1,2 3,4 1,7 4,5 2 5,1 0,75 0,9 PMN/g = número total de polimorfonucleares intraglomerulares/númerototal de glomérulos; PEC/g = número de glomérulos con proliferación extracapilar celular en más del 50 % del espacio de Bowman/número total de glomérulos. Número total de células CD45+, CD3+, CD4+, CD8+ y CD14+ intraglomerulares/número total de glomérulos. NC = no conocido. 2 38 INFILTRADO GLOMERULAR EN GN PROLIFERATIVAS Relación entre la actividad de la lesión glomerular y la infiltración intraglomerular de leucocitos El índice de leucocitos (CD45+) intraglomerulares fue 8,13 ± 7,95 en las biopsias con 3 PMN/g y 4,6 ± 4,63 en las biopsias con <3 pmn g fig 2 la celularidad cd45 fue 12 5 3 y 1 92 53 n="15," u="0," p < 0,0003) en las biopsias con 0,3 PEC/g y en las biopsias con < 0,3 PEC/g (fig. 3), respectivamente. Los linfocitos T (CD3+) intraglomerulares fueron más numerosos en las biopsias con indices de PMN/g y de PEC/g más altos, siendo la celularidad CD4+ m a y o r en las biopsias con 3 PMN/g que en las biopsias con < 3 PMN/g (3,85 ± 4,6 vs. 0,68 ± 1,12, n = 20, U = 21, p < 0,03); así como en las biopsias con 0,3 PEC/g que en las biopsias con < 0,3 PEC/g (3,46 ± 4,7 vs. 0,87 ± 1,3, n = 13). La macrófagos (CD14+) intraglomerulares fueron más numerosos en las biopsias con 3 PMN/g que en las biopsias con < 3 PMN/g, y mucho más numer o s o s en las biopsias con Ù> 0,3 PEC/g que en las b i o p s i a s con < 0,3 PEC/g (4,65 ± 3 , 9 4 vs. 1,31 ± 1,45, n = 17). DISCUSION A efectos de estudiar la contribución secuencial de l i n f o c i t o s T y de mácrofagos a la hipercelularidad glomerular en las GN proliferativas, hemos analizado la posible relación entre el carácter reciente o activo de la lesión glomerular, reflejado por la presencia de polimorfonucleares (PMN) intraglomerulares y por la p r e s e n c i a de proliferación extracapilar celular en m á s del 50 % del espacio de Bowman (PEC) y la composición de la infiltración intraglomerular de leucocitos. En las biopsias examinadas durante el primer m e s desde el inicio de la clínica renal, el índice PMN/g fue significativamente mayor a 3 18 y el índice PEC/g fue mayor a 0,3, lo que justificaría la utilidad de ambos valores como hallazgos histológicos tempranos o activos en las GN proliferativas. El tejido renal normal no ha mostrado células positivas intraglomerulares con ningún AM, mientras que sí han sido identificadas en las GN. El mayor número de leucocitos intraglomerulares detectado con AM en las biopsias con 3 o más PMN/g y en las biopsias con 0,3 o más PEC/g frente al detectado en las biopsias c o n índices inferiores confirma la contribución de l i n f o c i t o s T y de macrófagos a la hipercelularidad glomerular en las GN proliferativas. El papel de los PMN, linfocitos T y macrófagos es bien conocido en las GN experimentales. Los PMN afluyen al glomérulo en respuesta a la liberación temprana de péptidos n.º células +/n.º glomérulos 10 8 x ± DS 6 p < 0.03 4 2 0 CD 45 + CD 3 + CD 4 + 3, <3 cd 8 14 n º polimorfonucleares glomérulos: fig 2 media y desviacion estándar de la infiltración intraglomerular leucocitos cd45 linfocitos t cd3 subpoblaciones cd4 cd8 macrófagos cd14 según el índice intraglomerulares células glomérulos p < 0.0003 12 x ± DS 10 8 6 4 2 0 CD 45 + CD 3 + CD 4 + 3, <3 cd 8 14 n º semillas celulares glomérulos: fig 3 media y desviación estándar de la infiltración intraglomerular leucocitos cd45 linfocitos t cd3 subpoblaciones cd4 cd8 macrófaqos cd14 según el índice proliferación extracapilar celular quimiotácticos durante activación del complemento coagulación desencadenada por reacción local antígeno-anticuerpo los pmn favorecen proteinuria en gn aguda inducida inmunocomplejos circulantes 4 19 provocan aquélla fase heteróloga anticuerpos anti-mbg cuando hipercelularidad glom e r u l a está limitada al flóculo glomerular 2 0 afluencia glomérulo es posterior 5 6 alcanza su máxima intensidad las 24 horas detección inicial 7 desaparición progresiva 39 p arrizabalaga cols seguida monocitos-macrófagos respuesta linfoquinas segregadas in situ con actividad inhibitoria migración macrófago macrófagos f v o c 1-3 son responsables misma autóloga nuestra serie intraglomerulares fueron más numerosos proliferativas endocapilares que extracapilares lo confirma contribución endocapilar 21 escasa participación 22 biopsias recientes desde inicio clínica renal tardías aunque sin diferencias significativas probablemente tamaño muestra dispersión datos único caso sometido dos exámenes histológicos núms presentó sólo primer examen observaciones apuntan hacia cáracter temprano transitorio humanas como ha sido demostrado modelos experimentales colaboradores inductores significativamente índices mayores activ i d menores siendo significativa g vitro fenotipo colaborador inductor 23 implicado secreción así presencia simultánea células reciente activa podría reflejar contribuc ó produción mostrado otro lado citotóxicos supresores sugeriría papel citotóxicas supresoras desarrollo sem s epiteliales han indicado experimentos depleción 25 fue predominante sobre otros trabajos 26-30 incluso mostraron mayor celularidad independiente tipo endo embargo mucho numerosa pec menor apoyaría 40 semilunas 31-34 poseen receptores membrana para péptidos c3a fracción fc anticuerpo 35 biopsia número asociaciones entre hipocomplementemia 36 depósitos glomerul 1 fibrinógeno-fibrina 11 37 apoyarían infiltracón reflejase b sustancias quimiotácticas inflamación mediada inmunidad humoral no obstante muestran aparece hipersensibilidad tardía 38 frecuente lesiones glomerulares activas apoya sugiere un futuro muy lejano posibles estrategias terapeúticas dirigidas contra interacciones mediadas agradecimientos este trabajo forma parte proyecto 90 0304 investigación seguridad social agradecemos monoclonales dr vilella servicio inmunología hospital clínico dolores gónzalez asistencia técnica bibliografía hunsicker lg shearer tp plattner sb weisenburger d: the of monocytes serum sickness nephritis j exp med 150:413-425 1979 holdsworth sr neale tj wilson cb: participation macrophages and experimental immune comp x glomerulonephritis clin immunol immunopathol 15:510-524 1980 abrogation macrophage-dependent injury rabbit invest 68:686-698 1981 schreiner cf cotran rs unanue er: cellular immunity springer semin 5:251-267 1982 foster sj breije te lg: t-lymphocytes kidney int 33:384 abstract 1988 tipping pg sr: lymphocyte antib - 27:530-537 1985 infiltrado boyce lymphokine production by t- lymphocytes 30:673-677 1986 parra mosquera rodríguez-iturbe b: migration inhibition factor acute 38: 1118-1124 1990 9 hancock ww atkins rc: composition human rapidly progressive identified using monoclonal antibodies am nephrol 4:177-181 1984 10 hoo ke dh gee dc leucocyte analysis 31:964-972 1987 mirapeix darnell torras revert l: nephron 53:41-49 1989 12 análisis glomerulonefritis rápidamente progresivas nefrología 12:244250 1992 13 functional identity between pu lmon ary goodpasture antigen 30: glassock adler sg ward hs cohen ah: primary diseases en: brenner bm rector saunder co philadelphia 1194-1200 1991 15 bosch font borrellas rodríguez lópezsoto ingelmo m pronostic implication antineutrophil cytoplasmic autoantibodies with myeloperoxidase specificity anti-glomerular basement membrane disease 36:107-113 16 cob bo ld hale waldmann h: non-lineaje lfa-1 family common antigens: new previously defined clusters michael aj eds typing iii butler tanner ltd oxford pp 788-803 17 bernstein id self s: joint report myeloid section second international workshop on different antigens reinherz haynes bf nadler lm ii springer-verlag york 1-25 18 takeda kida h yokoyama tomosugi kobayashi k: w distinct types crescentic 37:285-293 wg: mechanisms immunocomplex 28:569-583 20 cocrane cg er dixon fj: role polymorphonuclear leucocytes complement nephrotoxic 122:99-119 1965 magil ab: associated remote visceral infection 22:169-175 k kraft c: antibody hypercellularity : z acuto fabbi bensussan milanese hd mener sc schlossman sf: clonotypic surface structure lymphocytes: biochemical receptor complex rev 81:95-129 granados mendick dl rennke hg: antibody-induced crescent formation wky rats: potential antibody-dependent cell cytotoxicity vivo 37:414 kawasaki yaoita tamamoto kihara i: depletion cells rats 41:1517-1526 26 si madan whiteside t: mononuclear subsets enumeration tissue immunopathhol 30:362-373 27 nolasco cameron js hartley coelho gh reuben r: nephritis: study 31:1160-1166 28 bolton wk innes dj sturgill bc kaiser dl: t-cells glomerulonephritis: clinicopathologic correlations 32:869-876 29 ü ga müller ca markovic-lipkouski kilper rb major histocompatibility components glomerulon 49:132-139 30 risler bohle ga: association interstitial leukocytes forms dial transplant 5:10-17 31 ab wadsworth ld: involvement crescents histochemical ultrastructural lab 47:160-166 32 boucher droz adafer noel lh: relationship betwen integrity bowman capsule 56:526-533 33 hl hooke dowling jp activation decreased function iga nephropathy 37:1552-1556 34 li activated 39:793-798 newman sl musson ra hensen pm: development receptors during maturation into 125:22-36 monga mazzuco barbiano busnach g: monocyte infiltration persistent ferrario castiglione colosanti belgioso gb bertoli amico detection 28:415-519 platt jl grant bw eddy aa ap: pop cutaneous delayed-type hipersensitivity 158:1227-1242 1983 andreu oppenheimer gallart infiltrate graft rejection: t-lymphocyte detected 44:1117 js: future nephrology special regard to advances treatment 42-s:203-214 41