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Dr&#46; Jos&#233; Miguel Lopez-Novoa&#44; Departamento de Fisiolog&#237;a y Farmacolog&#237;a&#44; Universidad de Salamanca&#59; Edificio Departamental&#44; Campus Miguel de Unamuno&#44; 37007 Salamanca&#46; Tel&#58; 923294472&#59; FAX&#58; 923294669&#59; E-mail&#58; jmlnovoa&#64;usal&#46;es</p> <br /> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Introducci&#243;n</span></p> <p class="elsevierStylePara">En palabras del premio N&#243;bel brit&#225;nico Francis Crick el &#191;dogma central de la biolog&#237;a molecular&#191; consiste en que existe un flujo de informaci&#243;n gen&#233;tica desde el genoma&#44; constituido fundamentalmente por el &#225;cido desoxirribonucleico &#40;DNA&#41; nuclear&#44; al &#225;cido ribonucleico mensajero &#40;mRNA&#41; y a las prote&#237;nas&#44; de forma que las instrucciones para sintetizar las prote&#237;nas&#44; contenidas en el DNA&#44; son copiadas al mRNA y &#233;ste sirve como molde para la s&#237;ntesis de las prote&#237;nas en el complejo ribosomas-ret&#237;culo endoplasm&#225;tico&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">Nuestro genoma est&#225; compuesto por alrededor de 30 mil genes&#46; Sin embargo&#44; cada una de nuestras c&#233;lulas usa s&#243;lo una parte de ellos en cada momento&#44; dependiendo del tipo celular y de otras situaciones como son el ciclo celular&#44; la influencia de hormonas o citocinas&#44; etc&#46; La decisi&#243;n de qu&#233; genes son expresados &#40;esto es&#44; qu&#233; nuevas prote&#237;nas se sintetizan&#41; y cuales no&#44; es controlada por la maquinaria que copia DNA a mRNA en un proceso llamado trascripci&#243;n&#46; &#201;ste&#44; a su vez&#44; puede ser modulado por varios factores&#46; Los principios fundamentales de la regulaci&#243;n de la expresi&#243;n gen&#233;tica fueron identificados hace m&#225;s de 40 a&#241;os por los franceses Fran&#231;ois Jacob y Jacques Monod&#44; tambi&#233;n galardonados con el premio N&#243;bel&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Desde principios de los a&#241;os 70 se han desarrollado muchas t&#233;cnicas basadas en los &#225;cidos nucleicos para silenciar genes con un fin terap&#233;utico&#44; entre ellas t&#233;cnicas de DNA antisentido &#40;secuencias de DNA complementarias a los mRNA&#41;&#44; t&#233;cnicas de mutantes dominantes negativos &#40;introducci&#243;n de DNAs que codifican para prote&#237;nas mutadas que ocupan el lugar de las originales pero no ejercen funci&#243;n&#41;&#44; y animales knock-out &#40;en los que se ha eliminado la trascripci&#243;n de un gen concreto&#41;&#44; entre otras&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">Los norteamericanos <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;nytimes&#46;com&#47;aponline&#47;world&#47;AP-Nobel-Medicine&#46;html&#63;hp&#38;ex&#61;1159848000&#38;en&#61;7043d541184b2817&#38;ei&#61;5094&#38;partner&#61;homepage" class="elsevierStyleCrossRefs">Andrew Z&#46; Fire &#40;Profesor en la Facultad de Medicina de la Universidad de Stanford&#41; y Craig C&#46; Mello</a> &#40;investigador del Instituto M&#233;dico Howard Hughes y Profesor de medicina molecular en la Facultad de Medicina de la Universidad de Massachussets&#41; han recibido el premio N&#243;bel en Medicina y Fisiolog&#237;a correspondiente al a&#241;o 2006 por descubrir el mecanismo del RNA de interferencia &#40;iRNA&#41;&#44; una de las aproximaciones al silenciamiento g&#233;nico que m&#225;s &#233;xito ha tenido&#46; El iRNA est&#225; basado en el silenciamiento del mRNA que codifica para la prote&#237;na que queremos eliminar por la degradaci&#243;n de ese mRNA&#46; Mediante esta t&#233;cnica se puede disminuir la expresi&#243;n de la prote&#237;na de inter&#233;s&#44; pero sin llegar a eliminarla&#46; Esta t&#233;cnica se est&#225; utilizando ampliamente en cultivos celulares puesto que es relativamente f&#225;cil de llevar a cabo&#46; Tambi&#233;n se utiliza en organismos vivos&#44; y se replantea utilizarla para el tratamiento de enfermedades basadas en la sobreexpresi&#243;n de un gen&#46; Si se conoce que la expresi&#243;n de un gen concreto causa una enfermedad&#44; se podr&#237;a usar la interferencia de RNA para evitarla&#46; El objetivo de este breve editorial es explicar el mecanismo de funcionamiento del iRNA y su posible utilidad en el campo de la nefrolog&#237;a cl&#237;nica y experimental&#46; En esta aportaci&#243;n mantendremos las siglas en ingl&#233;s&#44; pues son las m&#225;s frecuentemente utilizadas en la literatura y permiten evitar confusiones entre siglas traducidas de diferente forma&#46; Estas siglas en ingl&#233;s y su correspondiente traducci&#243;n al espa&#241;ol se detallan en la tabla 1&#46; </p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">&#191;Qu&#233; es el iRNA&#63;</span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara">Antes del descubrimiento del iRNA&#44; se hab&#237;a descrito en plantas un fen&#243;meno denominado silenciamiento g&#233;nico&#46; En experimentos dise&#241;ados para potenciar el color de las petunias aumentando&#44; mediante ingenier&#237;a gen&#233;tica&#44; el n&#250;mero de copias del gen responsable de la s&#237;ntesis del pigmento&#44; se observ&#243; que se produc&#237;a el efecto contrario&#44; origin&#225;ndose una flor blanca<span class="elsevierStyleSup">1</span> &#40;Figuras 1 y 2&#41;&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">En los a&#241;os siguientes se describi&#243; este fen&#243;meno en otras plantas transg&#233;nicas y en diferentes organismos modelo<span class="elsevierStyleSup">2</span>&#46; Aunque se identific&#243; que este efecto era producido por la inhibici&#243;n de la expresi&#243;n del gen que se intentaba potenciar y que el RNA ten&#237;a un papel fundamental en ello&#44; la explicaci&#243;n molecular del proceso no se conoci&#243; hasta el descubrimiento de Fire y Mello&#46; En 1998 estos investigadores estaban buscando un modo eficiente de silenciar genes como estrategia para estudiar su funci&#243;n en el desarrollo del nematodo <span class="elsevierStyleItalic">C&#46; elegans&#46;</span> Para ello&#44; inyectaron mol&#233;culas de RNA complementario al mRNA del gen que quer&#237;an silenciar &#40;antisentido&#41; en las c&#233;lulas del gusano&#46; Esta t&#233;cnica era por lo general muy poco repetible y los efectos producidos muy modestos&#46; En sus experimentos&#44; ni el uso de la cadena antisentido ni el de la secuencia complementaria a &#233;ste &#40;cadena sentido&#41; produjeron efecto alguno&#46; Inesperadamente&#44; una mezcla de ambas cadenas&#44; sentido y antisentido&#44; en donde estas dos especies moleculares de cadena sencilla hab&#237;an hibridado formando un RNA de doble cadena &#40;dsRNA&#44; de double stranded RNA&#41;&#44; produjo la eliminaci&#243;n casi completa de la expresi&#243;n del gen diana&#46; En su art&#237;culo original&#44; Fire y Mello demuestran que es posible el silenciamiento espec&#237;fico de un gen mediante la introducci&#243;n en la c&#233;lula de un dsRNA que contiene la secuencia hom&#243;loga&#46; Adem&#225;s&#44; proponen que este fen&#243;meno es mediado por un mecanismo end&#243;geno natural&#44; que tiene como consecuencia la degradaci&#243;n del mRNA y que es usado por la c&#233;lula para controlar la expresi&#243;n g&#233;nica&#46; Finalmente&#44; sugieren una conexi&#243;n entre este mecanismo y el fen&#243;meno descrito en plantas<span class="elsevierStyleSup">3</span>&#46; La publicaci&#243;n de este estudio tuvo una excepcional repercusi&#243;n en la comunidad cient&#237;fica&#46; En menos de un a&#241;o se document&#243; la presencia de iRNA en una gran diversidad de organismos modelo&#44; incluyendo tripanosomas&#44; varias especies de planarias&#44; la mosca del vinagre &#40;<span class="elsevierStyleItalic">Drosophyla melanogaster</span>&#41;<span class="elsevierStyleSup">4&#44;5</span>&#44; y el pez-cebra &#40;<span class="elsevierStyleItalic">Danio rerio</span>&#41;<span class="elsevierStyleSup">6-8</span>&#46; Los estudios en mam&#237;feros sufrieron unos a&#241;os de retraso debido a que la introducci&#243;n de fragmentos de dsRNA mayores de 30 nucle&#243;tidos en estas c&#233;lulas activa una reacci&#243;n fisiol&#243;gica que origina la muerte celular&#46; Finalmente&#44; el descubrimiento de que secuencias m&#225;s cortas inducen iRNA sin producir toxicidad demostr&#243; la generalidad de este fen&#243;meno entre los organismos eucariotas&#44; siendo la &#250;nica notable excepci&#243;n la levadura <span class="elsevierStyleItalic">S&#46; cerevisiae&#46;</span> Adem&#225;s&#44; las mutaciones en algunos genes requeridos para el funcionamiento del iRNA producen grandes defectos en el desarrollo&#44; especialmente en tejidos germinales y proliferativos&#44; sugiriendo un enlace entre esta v&#237;a y el desarrollo<span class="elsevierStyleSup">9-16</span>&#46; </p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Silenciamiento end&#243;geno</span></p> <p class="elsevierStylePara">El silenciamiento g&#233;nico mediante iRNA es un proceso que ocurre en las c&#233;lulas de manera natural&#46; La conservaci&#243;n del silenciamiento por acci&#243;n del iRNA es debida a la expresi&#243;n de unos RNAs peque&#241;os no codificantes llamados microRNAs &#40;miRNAs&#41;&#46; Estos miRNAs son cr&#237;ticos para el desarrollo normal y la fisiolog&#237;a de los tejidos en mam&#237;feros&#46; Adem&#225;s&#44; en varios tipos de c&#225;ncer se ha demostrado que existe una p&#233;rdida de expresi&#243;n de miRNAs sugiriendo que esta p&#233;rdida contribuye a la aparici&#243;n de la enfermedad<span class="elsevierStyleSup">17&#44;18</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Inicialmente los miRNAs se transcriben como precursores formados por una cadena de m&#225;s de 2 kb de longitud presentando extensiones de bases que pueden sufrir emparejamiento o adoptar estructuras de horquilla &#40;loop&#41;<span class="elsevierStyleSup">19&#44;20</span>&#46; Adem&#225;s&#44; en las regiones en las que hay un emparejamiento de bases pueden aparecer burbujas&#44; que&#44; junto con las estructuras en horquilla&#44; son importantes&#44; por una parte&#44; para el reconocimiento de los miRNAs por las enzimas celulares y por otra&#44; para la capacidad de esos RNAs para silenciar genes&#46; Los transcritos primarios de miRNA son identificados y procesados en el n&#250;cleo por una RNasa III&#44; llamada Drosha&#44; dando lugar a precursores de aproximadamente 70 nt de longitud&#44; conocidos como pre-miRNAs<span class="elsevierStyleSup">21</span>&#46; Estos salen al citoplasma donde son rotos por una segunda RNasa III llamada Dicer&#46; Dicer convierte los pre-miRNAs en miRNAs maduros de doble cadena de entre 21 y 23 nt de longitud<span class="elsevierStyleSup">22</span>&#46; Estos miRNAs maduros se asocian con un complejo de silenciamiento inducido por mRNA &#40;RISC&#44; de RNA-induced silencing complex&#41;<span class="elsevierStyleSup">23</span>&#46; RISC desenrolla el miRNA y una cadena se asocia con la cadena complementaria del mRNA diana<span class="elsevierStyleSup">24</span>&#46; Dependiendo del grado de homolog&#237;a entre un miRNA y su mRNA diana&#44; los complejos miRNA-RISC inhiben la funci&#243;n g&#233;nica por dos v&#237;as distintas<span class="elsevierStyleSup">25</span>&#58; </p> <p class="elsevierStylePara">a&#41; Si los miRNAs se emparejan imperfectamente se silencia la expresi&#243;n del gen por represi&#243;n de la traducci&#243;n&#44; o sea impidiendo que el mRNA se pueda leer por los ribosomas&#59; </p> <p class="elsevierStylePara">b&#41; Si los miRNAs presenten una secuencia id&#233;ntica al mRNA diana se inhibe la funci&#243;n g&#233;nica por degradaci&#243;n del mRNA<span class="elsevierStyleSup">26&#44;27</span>&#46; </p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Mecanismo de acci&#243;n del iRNA</span></p> <p class="elsevierStylePara">En 1998&#44; Fire y cols&#44; acu&#241;aron el t&#233;rmino iRNA para referirse a un fen&#243;meno de silenciamiento post-transcripcional de la expresi&#243;n g&#233;nica que ocurre en respuesta a la introducci&#243;n de un dsRNA en una c&#233;lula<span class="elsevierStyleSup">3</span>&#46; Adem&#225;s diversos experimentos en <span class="elsevierStyleItalic">C&#46; elegans</span> han demostrado que el iRNA puede propagarse de c&#233;lula a c&#233;lula de la misma manera que en el silenciamiento en plantas<span class="elsevierStyleSup">28</span>&#46; Aunque este silenciamiento sist&#233;mico no se ha encontrado en mam&#237;feros existen prote&#237;nas hom&#243;logas a las que se encuentran implicadas en el silenciamiento en nematodos&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Los mecanismos bioqu&#237;micos implicados se han determinado en diferentes sistemas<span class="elsevierStyleSup">29</span> y parece que muchos de los pasos del proceso est&#225;n bien conservados&#46; Para demostrar que son los mRNAs maduros los que son interferidos se realizaron diversos estudios que demostraron que la secuencia primaria del DNA diana permanece inalterada&#44; que la iniciaci&#243;n y elongaci&#243;n de la trascripci&#243;n no parece estar afectada y que&#44; mientras que los transcritos nucleares est&#225;n presentes&#44; los mRNA citoplasm&#225;ticos est&#225;n completamente ausentes por lo que&#44; al igual que en plantas&#44; los mRNAs diana son degradados principalmente en el citoplasma<span class="elsevierStyleSup">30</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Se han determinado dos mecanismos de silenciamiento por iRNA&#58; silenciamiento a trav&#233;s de RISC&#44; y el silenciamiento a trav&#233;s de RNA-polimerasa dependiente de RNA &#40;RdRP&#44; de RNA-dependent RNA polymerase&#41;&#46;</p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Silenciamiento a trav&#233;s de RISC</span></p> <p class="elsevierStylePara">Cuando en una c&#233;lula aparecen dsRNAs&#44; &#233;stos son rotos&#44; de manera dependiente de ATP&#44; mediante una enzima llamada Dicer&#44; en fragmentos de RNA de doble cadena m&#225;s peque&#241;os llamados RNAs de interferencia cortos <span class="elsevierStyleSup">22&#44;29&#44;31-33</span> &#40;siRNAs&#44; de <span class="elsevierStyleItalic">small interfering RNAs</span>&#41;&#46; Se ha observado en <span class="elsevierStyleItalic">C&#46;elegans</span> que Dicer interacciona con prote&#237;nas rde&#46; Las prote&#237;nas rde se unen a los dsRNAs y se cree que se les presentan a Dicer para su procesamiento<span class="elsevierStyleSup">34</span>&#46; Los mutantes que manifiestan un alto grado de resistencia al efecto del iRNA parece que poseen mutaciones en los genes que codifican las prote&#237;nas rde-1 y rde-4<span class="elsevierStyleSup">35</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Una vez que los siRNAs se forman&#44; son incorporados dentro RISC que&#44; una vez activado y de manera dependiente de ATP&#44; desenrolla los siRNAs manteniendo la cadena antisentido del siRNA<span class="elsevierStyleSup">22&#44;29&#44;31&#44;33&#44;36</span>&#46; Finalmente&#44; el complejo RISC es guiado por la cadena antisentido del siRNA que reconoce el mRNA concreto con su secuencia complementaria&#46; Una vez que est&#225; unido al mRNA&#44; RISC lo rompe en un sitio localizado aproximadamente en el medio de la secuencia hom&#243;loga por lo que se produce su inactivaci&#243;n<span class="elsevierStyleSup">22 </span>&#40;Figura3&#41;&#46;</p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Silenciamiento a trav&#233;s de RdRP</span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic"></span></p> <p class="elsevierStylePara">De manera alternativa al silenciamiento a trav&#233;s de RISC&#44; puede existir un silenciamiento a trav&#233;s de RdRP&#46; Existen varias teor&#237;as a cerca de este silenciamiento&#46; Por un lado se piensa que&#44; despu&#233;s de la rotura de los dsRNAs por Dicer&#44; los siRNAs se pueden separar al ser poco estables&#46; Una vez que las dos cadenas de RNA se han separado&#44; la cadena antisentido se une a un mRNA de secuencia complementaria&#46; Esta peque&#241;a cadena act&#250;a como &#191;<span class="elsevierStyleItalic">primer&#191;</span> de una RdRP que sintetiza una cadena complementaria de RNA&#44; de manera que se genera un dsRNA&#46; Este dsRNA es roto en siRNA por la acci&#243;n de la enzima Dicer pudiendo comenzar el proceso&#44; bien por este tipo de silenciamiento o bien por silenciamiento a trav&#233;s de RISC&#46; Generalmente los siRNAs son muy espec&#237;ficos&#44; sin embargo la elongaci&#243;n de los siRNAs usando los mRNAs como molde puede llevar a una interferencia no espec&#237;fica por la aparici&#243;n de secuencias hom&#243;logas a otros mRNAs&#44; generando un iRNA transitorio&#46; Este fen&#243;meno es particular de plantas y nematodos&#46; Otro modelo propueso es que tras el corte del mRNA por parte del complejo RISC&#44; se produce un RNA aberrante &#40;aRNA&#41; que es utilizado por una RdRP para sintetizar la cadena complementaria obteni&#233;ndose de nuevo un dsRNA que puede ser cortado por Dicer&#46; Esto puede llevarse a cabo porque las RdRPs pueden sintetizar RNA sin necesidad de un primer &#40;figura 3&#41;&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">El descubrimiento de estas prote&#237;nas en el iRNA y el silenciamiento g&#233;nico post-transcripcional proporciona una posible explicaci&#243;n para la alta eficacia de los dsRNAs en el silenciamiento&#44; ya que solo se requieren unas pocas mol&#233;culas de dsRNA para degradar una gran poblaci&#243;n de mRNAs<span class="elsevierStyleSup">3</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">iRNA en mam&#237;feros&#46;</span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara">El silenciamiento en mam&#237;feros mediante el iRNA parece ser llevado a cabo mediante RISC puesto que no se ha encontrado una prote&#237;na hom&#243;loga a la RdRP&#46; Tampoco se ha detectado ning&#250;n sistema de iRNA transitorio en c&#233;lulas de mam&#237;fero&#46; Esto puede ser debido a que la introducci&#243;n de grandes dsRNAs en c&#233;lulas de mam&#237;fero produce una disminuci&#243;n de la transcripci&#243;n y de la traducci&#243;n&#44; en parte debida a la activaci&#243;n de la prote&#237;na quinasa dependiente de dsRNA<span class="elsevierStyleSup">37</span> &#40;PKR&#44; de dsRNA activated protein kinase&#41;&#46; La PKR activada fosforila la subunidad peque&#241;a del factor de iniciaci&#243;n eucariota 2 alfa &#40;eIF2&#945;&#41;&#44; disminuyendo la traducci&#243;n&#46; Adem&#225;s&#44; PKR tambi&#233;n promueve la s&#237;ntesis de 2&#191;-5&#191;-&#225;cido poliaden&#237;lico&#44; que activa la RNasa L de forma no espec&#237;fica&#46; Estos fen&#243;menos colectivos pueden alterar dr&#225;sticamente el metabolismo celular y generalmente activan v&#237;as de apoptosis<span class="elsevierStyleSup">38</span>&#46; Esta respuesta al estr&#233;s podr&#237;a haberse desarrollado como una defensa contra las infecciones virales de forma que se bloquea la replicaci&#243;n viral impidiendo la s&#237;ntesis de prote&#237;nas y activando la apoptosis en las c&#233;lulas infectadas<span class="elsevierStyleSup">39</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">FUTURO TERAP&#201;UTICO DEL iRNA</span></p> <p class="elsevierStylePara">La supresi&#243;n de la expresi&#243;n de genes por iRNA es generalmente un fen&#243;meno transitorio<span class="elsevierStyleSup">40</span>&#46; El silenciamiento g&#233;nico en c&#233;lulas de mam&#237;fero est&#225; limitado por el n&#250;mero de mol&#233;culas de siRNA que se introducen&#46; El n&#250;mero de siRNAs decrece con el tiempo debido a la diluci&#243;n que se produce cuando las c&#233;lulas se dividen y a la degradaci&#243;n de las enzimas celulares&#46; Una vez que los siRNAs son introducidos la expresi&#243;n g&#233;nica se recupera despu&#233;s de entre 96 y 120 horas&#44; o de entre 3 y 5 divisiones celulares despu&#233;s de la transfecci&#243;n<span class="elsevierStyleSup">41</span>&#46; Los primeros esfuerzos se enfocaron sobre la administraci&#243;n directa de siRNAs sint&#233;ticos en animales&#44; desarrollando tres m&#233;todos principales que parecen ser los que m&#225;s eficacia tienen&#58; a&#41; la inyecci&#243;n intravenosa de siRNAs&#44; creando un &#191;back-flow&#191; en el sistema venoso&#44; que fuerza a la soluci&#243;n del siRNA a introducirse en diversos &#243;rganos<span class="elsevierStyleSup">42&#44;43</span>&#59; b&#41; la inyecci&#243;n de peque&#241;os vol&#250;menes de siRNAs empaquetados en liposomas cati&#243;nicos&#44; observ&#225;ndose el silenciamiento en tejidos con un alto flujo sangu&#237;neo<span class="elsevierStyleSup">44</span>&#59; c&#41; la electroporaci&#243;n de siRNAs directamente en tejidos y &#243;rganos<span class="elsevierStyleSup">45-48</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">La soluci&#243;n para obtener un silenciamiento g&#233;nico estable a trav&#233;s del iRNA ha sido el desarrollo de sistemas de expresi&#243;n que producen siRNAs&#46; Esto fue llevado a cabo por varios grupos<span class="elsevierStyleSup">41&#44;49&#44;50 </span>que utilizaron el promotor U6 o H1&#44; para expresar una horquilla peque&#241;a de RNA &#40;shRNA&#44; de small hairpin RNA&#41;&#46; Los shRNAs pueden ser procesados por Dicer para producir siRNAs&#46; Varios grupos han utilizado pl&#225;smidos basados en shRNAs para obtener un silenciamiento <span class="elsevierStyleItalic">in vivo</span> de mayor duraci&#243;n<span class="elsevierStyleSup">51</span>&#46; Tambi&#233;n se han utilizado vectores virales para la expresi&#243;n de shRNAs en las c&#233;lulas&#46; As&#237; se han realizado estudios con retrovirus<span class="elsevierStyleSup">52-57</span>&#44; lentivirus<span class="elsevierStyleSup">52&#44;55&#44;57&#44;58</span>&#44; adenovirus<span class="elsevierStyleSup">59-61</span> y virus asociados a adenovirus<span class="elsevierStyleSup">62&#44;63</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Aplicaciones pr&#225;cticas del iRNA </span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara">La tecnolog&#237;a derivada del iRNA ha revolucionado la forma en que podemos analizar la funci&#243;n de los genes&#46; Ahora podemos llevar a cabo estudios de silenciamiento g&#233;nico de una manera sencilla y eficiente&#46; En ellos introducimos en las c&#233;lulas dsRNAs o siRNAs dise&#241;ados artificialmente para silenciar un gen determinado&#46; Esta tecnolog&#237;a representa una oportunidad &#250;nica para identificar genes implicados en cualquier proceso biol&#243;gico o enfermedad&#46; Adem&#225;s&#44; debido a su sencillez&#44; estos estudios pueden ser realizados en miles de genes a la vez&#44; d&#225;ndonos una perspectiva global del problema biol&#243;gico que se estudia&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">Por ejemplo&#44; nosotros estamos estudiando el efecto que tiene el silenciamiento del gen de la endoglina&#44; una mol&#233;cula que parece regular el efecto profibr&#243;tico del factor de crecimiento transformante beta &#40;TGF-beta&#41;&#44; sobre la s&#237;ntesis de matriz extracelular<span class="elsevierStyleSup">64</span>&#46; Nuestros resultados preliminares parecen demostrar que el silenciamiento de endoglina con un siRNA espec&#237;fico modifica la producci&#243;n de matriz extracelular por las c&#233;lulas mesangiales &#40;Patricia &#193;lvarez-Mu&#241;oz y Jos&#233; M&#46; Lopez-Novoa&#59; resultados sin publicar&#41;&#46; Asimismo&#44; en un estudio en el que trat&#225;bamos de relacionar la expresi&#243;n de endoglina con la regulaci&#243;n de la expresi&#243;n de la ciclooxigenasa -2 &#40;COX-2&#41;&#44; la transfecci&#243;n de las c&#233;lulas endoteliales con un siRNA para endoglina aument&#243; la expresi&#243;n de COX-2 tanto en condiciones basales como en respuesta a TGF-beta1<span class="elsevierStyleSup">65</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Otro ejemplo de un trabajo muy recientemente publicado en Kidney International&#44; escogido entre muchos trabajos del mismo tipo&#44; demuestra que el silenciamiento con siRNA del gen ELMO1 &#40;de engulfment and cell motility 1&#41;&#44; un gen de susceptibilidad a la nefropat&#237;a diab&#233;tica y que se hiperexpresa en diversos modelos animales de fibrosis renal&#44; suprim&#237;a la expresi&#243;n de fibronectina que se observaba en c&#233;lulas que expresan este gen&#44; sugiriendo que la expresi&#243;n de ELMO1 contribuye al desarrollo y progresi&#243;n de la nefropat&#237;a diab&#233;tica a trav&#233;s de la alteraci&#243;n de la s&#237;ntesis de matriz extracelular<span class="elsevierStyleSup">66</span>&#46; Otro ejemplo es un trabajo muy reciente publicado en American Journal of Transplantation en el que demuestran que el silenciamiento con siRNA de C3&#44; el componente central de todas las v&#237;as de activaci&#243;n del complemento&#44; es efectivo inhibiendo la expresi&#243;n de C3 en un modelo de isquemia&#47;reperfusi&#243;n renal experimental en rat&#243;n&#44; reduciendo el da&#241;o renal&#44; la producci&#243;n del factor de necrosis tumoral alfa &#40;tumoral necrosis factor alpha&#59; TNF-alpha &#41; y la mortalidad inducida por la isquemia&#47;reperfusi&#243;n&#46; Los autores sugieren que el uso del siRNA representa una nueva posibilidad terap&#233;utica en la necrosis tubular aguda o en la preservaci&#243;n de &#243;rganos para trasplante<span class="elsevierStyleSup">67</span>&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">Aparte de su incuestionable relevancia como herramienta de investigaci&#243;n&#44; esta tecnolog&#237;a est&#225; empezando a ser aplicada a la terapia&#46; As&#237;&#44; se trabaja para que en un futuro pueda usarse para silenciar&#44; por ejemplo&#44; genes alterados en enfermedades tumorales<span class="elsevierStyleSup">68</span>&#44; o genes virales en pacientes con infecciones v&#237;ricas&#46; Inhibiendo la expresi&#243;n de genes virales involucrados en la replicaci&#243;n&#44; es posible inhibir &#233;sta dentro de las c&#233;lulas y&#44; por lo tanto&#44; la capacidad de los virus para multiplicarse&#44; lisar las c&#233;lulas e invadir otras&#46; Hay varios estudios que describen el uso del iRNA para inhibir la replicaci&#243;n del VIH-1 y del virus de la hepatitis B<span class="elsevierStyleSup">69-72</span>&#46; Giladi y cols &#40;2003&#41;<span class="elsevierStyleSup">73</span> describieron el uso de los siRNA para silenciar tres secuencias diferentes de mRNA <span class="elsevierStyleItalic">in vivo </span>en ratones infectados con el virus de la hepatitis B<span class="elsevierStyleItalic">&#46;</span> Los resultados oscilaron entre inhibiciones del 60&#37; al 90&#37; dependiendo de las secuencias de siRNA utilizadas y la prote&#237;na silenciada&#46; Tambi&#233;n se la planteado el uso del iRNA contra la infecci&#243;n por el virus de la hepatitis C<span class="elsevierStyleSup">74&#44;75</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Otra diana terap&#233;utica &#40;entre las muchas posibles&#41; son los genes causantes de los niveles elevados de colesterol en sangre&#46; En relaci&#243;n con esto&#44; se ha publicado recientemente en Nature que el silenciamiento del gen de la apolipoproteina B &#40;ApoB&#41; in primates mediante la inyecci&#243;n intravenosa de siRNAs espec&#237;ficos para ApoB y encapsulados en part&#237;culas estables un complejo &#225;cidos nucleicos-l&#237;pidos&#44; dio lugar a reducciones significativas en los niveles circulantes de ApoB&#44; colesterol y LDL&#44; que se observaron desde 24 horas despu&#233;s de la inyecci&#243;n hasta 11 d&#237;as despu&#233;s&#44; lo que demuestra la eficacia y la larga duraci&#243;n de este tipo de tratamiento en animales muy parecidos al hombre<span class="elsevierStyleSup">76</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">En modelos animales de insuficiencia hep&#225;tica aguda debida a inducci&#243;n de la apoptosis de los hepatocitos por agonistas de Fas&#44; el tratamiento con siRNA contra el gen de Fas protegi&#243; a los animales contra la hepatitis fulminante<span class="elsevierStyleSup">77</span>&#46; Aunque no conozcamos que se hayan publicado hasta la fecha estudios cl&#237;nicos rigurosos basados en la terapia g&#233;nica&#44; hay compa&#241;&#237;as como &#191;siRNA Therapeutics&#191; y &#191;Alnylam Pharmaceuticals&#191; que est&#225;n realizando estudios cl&#237;nicos preliminaries desde el a&#241;o 2005<span class="elsevierStyleSup">78</span>&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">En resumen&#44; el descubrimiento del iRNA ha expandido enormemente el conocimiento cient&#237;fico sobre los mecanismos implicados en la regulaci&#243;n g&#233;nica&#46; Adem&#225;s&#44; el desarrollo de tecnolog&#237;as basadas en el iRNA nos ha equipado a los investigadores con poderos&#237;simas herramientas experimentales para estudiar la funci&#243;n g&#233;nica&#46; La adaptaci&#243;n de esta tecnolog&#237;a a la terapia de diferentes tipos de patolog&#237;as&#44; aunque a&#250;n en desarrollo&#44; ha abierto expectativas terap&#233;uticas sin precedentes&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Agradecimientos</p> <p class="elsevierStylePara">Patricia &#193;lvarez-Mu&#241;oz es becaria FPU del Ministerio de Educaci&#243;n y Ciencia Los estudios de nuestro laboratorio han sido financiados por el proyecto BFU2004-00285 del Ministerio de Educaci&#243;n y Ciencia y SA22&#47;03 de la Junta de Castilla y Leon</p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">BIBLIOGRAF&#205;A</span></p> <p class="elsevierStylePara">1&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;12354959&#38;query&#95;hl&#61;17" class="elsevierStyleCrossRefs">Napoli C&#44; Lemieux C&#44; Jorgensen R</a>&#58; Introduction of a Chimeric  Chalcone  Synthase  Gene into Petunia Results in Reversible Co-Suppression of Homologous  Genes in trans&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Plant Cell</span> Apr&#59;2&#58; 279-289&#44; 1990&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">2&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;8843939&#38;query&#95;hl&#61;26" class="elsevierStyleCrossRefs">Jorgensen RA&#44; Cluster PD&#44; English J&#44; Que Q&#44; Napoli CA</a>&#58; Chalcone synthase cosuppression phenotypes in petunia flowers&#58; comparison of sense vs&#46; antisense constructs and single-copy vs&#46; complex T-DNA sequences&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Plant Mol Biol</span> Aug&#59;31&#58; 957-73&#44; 1993&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">3&#46; Fire A&#44; Xu S&#44; Montgomery MK&#44; Kostas SA&#44; Driver SE&#44; Mello CC&#58; Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in <span class="elsevierStyleItalic">Caenorhabditis</span> <span class="elsevierStyleItalic">elegans&#46; Nature </span>391&#58; 806&#191;11&#44; 1998&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">4&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;9875855&#38;query&#95;hl&#61;22" class="elsevierStyleCrossRefs">Kennerdell JR&#44; Carthew RW</a>&#58; Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell</span> Dec 23&#59;95&#58; 1017-26&#44; 1998&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">5&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;10932163&#38;query&#95;hl&#61;23" class="elsevierStyleCrossRefs">Kennerdell JR&#44; Carthew RW</a>&#58; Heritable gene silencing in Drosophila using double-stranded RNA&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Nat</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biotechnol</span> Aug&#59;18&#58; 896-8&#44; 2000&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">6&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;10625563&#38;query&#95;hl&#61;27" class="elsevierStyleCrossRefs">Li YX&#44; Farrell MJ&#44; Liu R&#44; Mohanty N&#44; Kirby ML</a>&#58; Double-stranded RNA injection produces null phenotypes in zebrafish&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Dev Biol</span>&#46; Jan 15&#59;217&#58; 394-405&#44; 2000&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">7&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;11917028&#38;query&#95;hl&#61;24" class="elsevierStyleCrossRefs">Zhou Y&#44; Ching YP&#44; Kok KH&#44; Kung HF&#44; Jin DY</a>&#58; Post-transcriptional suppression of gene expression in Xenopus embryos by small interfering RNA&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nucleic Acids Res</span> Apr 1&#59;30&#58;1664-1669&#44; 2002&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">8&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;11587535&#38;query&#95;hl&#61;33" class="elsevierStyleCrossRefs">Svoboda P&#44; Stein P&#44; Schultz RM&#46;</a> RNAi in mouse oocytes and preimplantation embryos&#58; effectiveness of hairpin dsRNA&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Biochem</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biophys</span> <span class="elsevierStyleItalic"> Res Commun</span> Oct 12&#59;287&#58; 1099-1104&#44; 2001&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">9&#46;  Wilson  JE&#44;  Connell  JE&#44; Macdonald PM&#58; Aubergine enhances  oskar translation in the <span class="elsevierStyleItalic">Drosophila </span>ovary&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Development </span>122&#58; 1631-1639&#44; 1996&#46;     </p> <p class="elsevierStylePara">10&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;9427751&#38;query&#95;hl&#61;17&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Bohmert K&#44; Camus I&#44; Bellini C&#44; Bouchez D&#44; Caboche M&#44; Benning C</a>&#58; AGO1 defines a novel locus of Arabidopsis controlling leaf development&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">EMBO</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">J</span> 17&#58; 170-180&#44; 1998&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">11&#46; Cox DN&#44;  Chao  A&#44; Baker J&#44;  Chang  L&#44;  Qiao  D&#44;  Lin  H&#58; A novel class of evolutionarily conserved genes defined by piwi are essential for stem cell self-renewal&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Gen Dev</span> 12&#58; 3715-3727&#44; 1998&#46;        </p> <p class="elsevierStylePara">12&#46; Lynn K&#44;  Fernandez A&#44;  Aida M&#44; Sedbrook J&#44; Tasaka M&#44;  Masson  P&#44;Barton MK&#58; The PINHEAD&#47;ZWILLE gene acts pleiotropically in <span class="elsevierStyleItalic">Arabidopsis </span>development and has overlapping functions with the ARGONAUTE1 gene&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Development</span> 126&#58; 469-481&#44; 1999&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">13&#46;  Cerutti  L&#44; Mian N&#44;  Bateman  A&#58; Domains in gene silencing and cell differentiation proteins&#58; the novel  PAZ domain and redefinition of the Piwi domain&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Trends </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biochem</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>25&#58; 481-482&#44; 2000&#46;       </p> <p class="elsevierStylePara">14&#46;  Fagard  M&#44;  Boutet  S&#44; Morel J-B&#44; Bellini C&#44;  Vaucheret  H&#58; AGO1&#44; QDE-2&#44; and RDE-1 are related proteins required for post-transcriptional gene silencing in plants&#44; quelling in fungi&#44; and RNA interference in animals&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> USA</span> 97&#58;11650&#191;11654&#44; 2000&#46;          </p> <p class="elsevierStylePara">15&#46;  Smardon  A&#44;  Spoerke  J&#44;  Stacey  S&#44; Klein M&#44;  Mackin  N&#44; Maine E&#58; EGO-1 is related to RNA-directed RNA polymerase and functions in germ-line development and RNA interference in <span class="elsevierStyleItalic">C&#46; elegans</span>&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Curr</span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biol</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>10&#58; 169-178&#44; 2000&#46;          </p> <p class="elsevierStylePara">16&#46; Schmidt A&#44; Palumbo G&#44; Bozzetti MP&#44; Tritto P&#44; Pimpinelli S&#44; Schafer U&#58; Genetic and molecular characterization of sting&#44; a gene involved in crystal formation and meiotic drive in the male germ line of <span class="elsevierStyleItalic">Drosophila melanogaster</span>&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Genetics </span>151&#58; 749-760&#44; 1999&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">17&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12434020&#38;query&#95;hl&#61;11&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Calin GA&#44; Dumitru CD&#44; Shimizu M&#44; Bichi R&#44; Zupo S&#44; Noch E&#44; Aldler H&#44; Rattan S&#44; Keating M&#44; Rai K&#44; Rassenti L&#44; Kipps T&#44; Negrini M&#44; Bullrich F&#44; Croce CM</a>&#58; Frequent deletions and down-regulation of micro- RNA genes miR15 and miR16 at 13q14 in chronic lymphocytic leukemia&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> U S A</span> 99&#58; 15524-9&#46; 2002&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">18&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;14973191&#38;query&#95;hl&#61;12&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Calin GA&#44; Sevignani C&#44; Dumitru CD&#44; Hyslop T&#44; Noch E&#44; Yendamuri S&#44; Shimizu M&#44; Rattan S&#44; Bullrich F&#44; Negrini M&#44; Croce CM</a>&#58; Human microRNA genes are frequently located at fragile sites and genomic regions involved in cancers&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span> <span class="elsevierStyleItalic">USA</span> 101&#58; 2999-3004&#44; 2004&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">19&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12007417&#38;query&#95;hl&#61;13&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Lagos-Quintana M&#44; Rauhut R&#44; Yalcin A&#44; Meyer J&#44; Lendeckel W&#44; Tuschl T</a>&#58; Identification of tissue specific microRNAs from mouse&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Curr</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biol</span> 12&#58; 735-7399&#44; 2002&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">20&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;11981565&#38;query&#95;hl&#61;15&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Lee NS&#44; Dohjima T&#44; Bauer G&#44; Li H&#44; Li MJ&#44; Ehsani A&#44; Salvaterra P&#44; Rossi J</a>&#58; Expression of small interfering RNAs targeted against HIV-1 rev transcripts in human cells&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Nat</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biotechnol</span> 20&#58; 500-505&#44; 2002&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">21&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;14508493&#38;query&#95;hl&#61;10&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Lee Y&#44; Ahn C&#44; Han J&#44; Choi H&#44; Kim J&#44; Yim J&#44; Lee J&#44; Provost P&#44; Radmark O&#44; Kim S&#44; Kim VN</a>&#58; The nuclear RNase III Drosha initiates microRNA processing&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature</span> 425&#58; 415-419&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">22&#46; Bernstein E&#44; Caudy AA&#44; Hammond SM&#44;  Hannon  GJ&#58; Role for a bidentate ribonuclease in the initiation step of RNA interference&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature </span>409&#58; 363&#191;66&#44; 2001&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">23&#46; Hutvagner G&#44; Zamore PD&#58; RNAi&#58; nature abhors a double-strand&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Curr Opin</span> <span class="elsevierStyleItalic">Genet Dev </span>12&#58; 225&#191;32&#44; 2002&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">24&#46; Martinez J&#44; Patkaniowska A&#44; Urlaub H&#44; Luhrmann R&#44; Tuschl T&#58; Singlestranded antisense siRNAs guide target RNA cleavage in RNAi&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell </span>110&#58; 563&#191;74&#44; 2002&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">25&#46;  Bartel  DP&#58; 2004&#46; MicroRNAs&#58; genomics&#44; biogenesis&#44; mechanism&#44; and function&#46; <span class="elsevierStyleItalic"><a href="javascript&#58;AL&#95;get&#40;this&#44;&#37;20&#39;jour&#39;&#44;&#37;20&#39;Cell&#46;&#39;&#41;&#59;" class="elsevierStyleCrossRefs">Cell</a></span> 116&#58; 281-97&#44; 2004&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">26&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;11461699&#38;query&#95;hl&#61;3&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Grishok A&#44; Pasquinelli AE&#44; Conte D&#44; Li N&#44; Parrish S&#44; Ha I&#44; Baillie DL&#44; Fire A&#44; Ruvkun G&#44; Mello CC</a>&#58;  Genes and mechanisms related to RNA interference regulate expression of the small temporal RNAs that control <span class="elsevierStyleItalic">C&#46; elegans </span>developmental timing&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell </span>106&#58;23&#191;34&#44; 2001&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">27&#46;  Hutvagner  G&#44;  McLachlan  J&#44;  Pasquinelli  AE&#44;  Balint  E&#44;  Tuschl  T&#44; Zamore PD&#58; A cellular function for the RNAinterference enzyme Dicer in the maturation of the let-7 small temporal RNA&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Science </span>293&#58; 834&#191;38&#44; 2001&#46;          </p> <p class="elsevierStylePara">28&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;10461204&#38;query&#95;hl&#61;13" class="elsevierStyleCrossRefs">Fire A</a>&#58; RNA-triggered gene silencing&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Trends Genet </span>15&#58; 358-63&#44; 1999&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">29&#46; Hammond SM&#44; Bernstein E&#44; Beach D&#44;  Hannon  GJ&#58; An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing in <span class="elsevierStyleItalic">Drosophila </span>cells&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature</span> 404&#58; 293-296&#44; 2000&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">30&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;9860998&#38;query&#95;hl&#61;8" class="elsevierStyleCrossRefs">Montgomery MK&#44; Xu S&#44; Fire A</a>&#58; RNA as a target of double-stranded RNA-mediated genetic interference in Caenorhabditis elegans&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> U S A</span> 95&#58; 15502-15507&#44; 1998&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">31&#46;  Elbashir  SM&#44;  Harborth  J&#44;  Lendeckel  W&#44;  Yalcin  A&#44; Weber K&#44;  Tuschl  T&#58; Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature </span>411&#58; 494&#191;98&#44; 2001&#46;          </p> <p class="elsevierStylePara">32&#44; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;10542148&#38;query&#95;hl&#61;20" class="elsevierStyleCrossRefs">Hamilton AJ&#44; Baulcombe DC</a>&#58; A species of small antisense RNA in posttranscriptional gene silencing in plants&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Science</span> 286&#58; 950-2&#44; 1999&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">33&#46;  Zamore  P&#44;  Tuschl  T&#44; Sharp P&#44;  Bartel  D&#58; RNAi&#58; double-stranded RNA directs the ATP dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell</span> 101&#58; 25-33&#44; 2000&#46;      </p> <p class="elsevierStylePara">34&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;12110183&#38;query&#95;hl&#61;17" class="elsevierStyleCrossRefs">Tabara H&#44; Yigit E&#44; Siomi H&#44; Mello CC</a>&#58; The dsRNA binding protein RDE-4 interacts with RDE-1&#44; DCR-1&#44; and a DExH-box helicase to direct RNAi in C&#46; elegans&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell</span> 109&#58; 861-71&#44; 2002&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">35&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;10535731&#38;query&#95;hl&#61;8&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Tabara H&#44; Sarkissian M&#44; Kelly WG&#44; Fleenor J&#44; Grishok A&#44; Timmons L&#44; Fire A&#44; Mello CC</a>&#58; The rde-1 gene&#44; RNA interference&#44; and transposon silencing in C&#46; elegans&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell</span> 99&#58; 123-32&#44; 1999&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">36&#46;  Nyk&#228;nen  A&#44;  Haley  B&#44; Zamore PD&#58; ATP requirements and small interfering RNA structure in the RNA interference pathway&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell</span> 107&#58; 309-321&#44; 2001&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">37&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;9191145&#38;query&#95;hl&#61;44&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Williams BR</a>&#58; Role of the double-stranded RNA-activated protein kinase &#40;PKR&#41; in cell regulation&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Biochem</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Soc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Trans</span> 25&#58; 509-513&#44; 1997&#46;   </p> <p class="elsevierStylePara">38&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;11232238&#38;query&#95;hl&#61;7" class="elsevierStyleCrossRefs">Gil J&#44; Esteban M</a>&#58; Induction of apoptosis by the dsRNA-dependent protein kinase &#40;PKR&#41;&#58; mechanism of action&#46;<span class="elsevierStyleItalic"> Apoptosis</span> 5&#58; 107-114&#44; 2000&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">39&#46; Stark GR&#44;  Kerr  IM&#44; Williams BR&#44;Silverman RH&#44; Schreiber RD&#58; How cells respond to interferons&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Annu </span> <span class="elsevierStyleItalic">Rev</span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biochem</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>67&#58; 227&#191;264&#44; 1998&#46;   </p> <p class="elsevierStylePara">40&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;11604515&#38;query&#95;hl&#61;6" class="elsevierStyleCrossRefs">Yang S&#44; Tutton S&#44; Pierce E&#44; Yoon K</a>&#58; Specific double-stranded RNA interference in undifferentiated mouse embryonic stem cells&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Mol Cell Biol</span> 21&#58; 7807-7816&#44; 2001&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">41&#46;  Brummelkamp  TR&#44; Bernards R&#44;  Agami  R&#58; A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian cells&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Science </span>296&#58;550&#191;553&#46; 2002&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">42&#46; McCaffrey AP&#44; Meuse L&#44; Pham TT&#44; Conklin DS&#44; Hannon GJ&#44; KayMA&#58; RNA interference in adult mice&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature </span>418&#58; 38&#191;39&#44; 2002&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">43&#46; Lewis DL&#44; Hagstrom JE&#44; Loomis AG&#44; Wolff JA&#44;  Herweijer  H&#58; Efficient delivery of siRNA for inhibition of gene expression in postnatal mice&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Nat</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Genet</span> 32&#58; 107&#191;108&#44; 2002&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">44&#46; Sorensen DR&#44;  Leirdal  M&#44;  Sioud  M&#58;  Gene silencing by systemic delivery of synthetic siRNAs in adult mice&#46; <span class="elsevierStyleItalic">J Mol Biol </span>327&#58; 761&#191;766&#44; 2003&#46;     </p> <p class="elsevierStylePara">45&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;14716682&#38;query&#95;hl&#61;10&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Kishida T&#44; Asada H&#44; Gojo S&#44; Ohashi S&#44; Shin-Ya M&#44; Yasutomi K&#44; Terauchi R&#44; Takahashi KA&#44; Kubo T&#44; Imanishi J&#44; Mazda O</a>&#58; Sequencespecific gene silencing in murine muscle induced by electroporation-mediated transfer of short interfering RNA&#46; <span class="elsevierStyleItalic">J </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Gene</span> <span class="elsevierStyleItalic">Med </span>6&#58; 105&#191;110&#44; 2004&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">46&#46; Konishi Y&#44;  Stegmuller  J&#44;  Matsuda  T&#44;  Bonni  S&#44;  Bonni  A&#58; Cdh1-APC controls axonal growth and patterning in the mammalian brain&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Science </span>303&#58; 1026&#191;1030&#44; 2004&#46;        </p> <p class="elsevierStylePara">47&#46; Kong XC&#44; Barzaghi P&#44; Ruegg MA&#58; Inhibition of synapse assembly in mammalian muscle in vivo by RNA interference&#46; <span class="elsevierStyleItalic">EMBO Rep </span>5&#58; 183&#191;188&#44; 2004&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">48&#46;  Matsuda  T&#44; Cepko CL&#58; Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Proc&#46; Natl&#46;Acad&#46; Sci&#46; USA </span>101&#58; 16&#191;22&#44; 2004&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">49&#46; Sui G&#44; Soohoo C&#44; Affar elB&#44; Gay F&#44; Shi Y&#44; Forrester WC&#58; A DNAvector-based RNAi technology to suppress gene expression in mammalian cells&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span> <span class="elsevierStyleItalic">USA </span>99&#58; 5515&#191;5520&#44; 2002&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">50&#46; Paddison PJ&#44; Caudy AA&#44; Hannon GJ&#58; Stable suppression of gene expression by RNAi in mammalian cells&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> USA </span>99&#58; 1443&#191;1448&#44; 2002&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">51&#46;  Zhang  L&#44; Yang N&#44; Mohamed-Hadley A&#44; Rubin SC&#44;  Coukos  G&#58;  Vectorbased  RNAi&#44; a novel tool for isoformspecific knock-down of VEGF and anti-angiogenesis gene therapy of cancer&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Biochem</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biophys</span> <span class="elsevierStyleItalic"> Res Commun</span> 303&#58; 1169&#191;1178&#44; 2003&#46;        </p> <p class="elsevierStylePara">52&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12551891&#38;query&#95;hl&#61;5&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Dirac AM&#44; Bernards R</a>&#58; Reversal of senescence in mouse fibroblasts through lentiviral suppression of p53&#46; <span class="elsevierStyleItalic">J </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biol</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Chem</span> Apr 4&#59;278&#40;14&#41;&#58; 11731-11734&#44; 2003&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">53&#46;  Hemann  MT&#44;  Fridman  JS&#44;  Zilfou  JT&#44;  Hernando  E&#44;  Paddison  PJ&#44; Cordon-Cardo C&#44;  Hannon  GJ&#44; Lowe SW&#58; An epi-allelic series of p53 hypomorphs created by stable RNAi produces distinct tumor phenotypes in vivo&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Nat</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Genet</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>33&#58; 396&#191;400&#44; 2003&#46;              </p> <p class="elsevierStylePara">54&#46; Rubinson DA&#44; Dillon CP&#44; Kwiatkowski AV&#44; Sievers C&#44; Yang L&#44; Kopinja J&#44; Rooney DL&#44; Ihrig MM&#44; McManus MT&#44; Gertler FB&#44; Scott ML&#44; Van Parijs L&#58; A lentivirus-based system to functionally silence genes in primary mammalian cells&#44; stem cells and transgenic mice by RNA interference&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Nat&#46;</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Genet</span> <span class="elsevierStyleItalic">&#46; </span>33&#58; 401&#191;406&#44; 2003&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">55&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12649500&#38;query&#95;hl&#61;9&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Stewart SA&#44; Dykxhoorn DM&#44; Palliser D&#44; Mizuno H&#44; Yu EY&#44; An DS&#44; Sabatini DM&#44; Chen IS&#44; Hahn WC&#44; Sharp PA&#44; Weinberg RA&#44; Novina CD</a>&#58; Lentivirus-delivered stable gene silencing by RNAi in primary cells&#46; <span class="elsevierStyleItalic">RNA</span> 9&#58; 493-501&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">56&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12552109&#38;query&#95;hl&#61;14&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Tiscornia G&#44; Singer O&#44; Ikawa M&#44; Verma IM</a>&#58; A general method for gene knockdown in mice by using lentiviral vectors expressing small interfering RNA&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span> <span class="elsevierStyleItalic">USA</span> 100&#58; 1844-1848&#44; 2003&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">57&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;14634645&#38;query&#95;hl&#61;17&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Hommel JD&#44; Sears RM&#44; Georgescu D&#44; Simmons DL&#44; DiLeone RJ</a>&#58; Local gene knockdown in the brain using viral-mediated RNA interference&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nat Med</span> 9&#58; 1539-1544&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">58&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12542850&#38;query&#95;hl&#61;4&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Abbas-Terki T&#44; Blanco-Bose W&#44; Deglon N&#44; Pralong W&#44; Aebischer P</a>&#58; Lentiviral-mediated RNA interference&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Hum </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Gene</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Ther</span> 13&#58; 2197-2201&#44; 2002&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">59&#46; Xia H&#44; Mao Q&#44; Paulson HL&#44; Davidson BL&#58; siRNA-mediated gene silencing in vitro and in vivo&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Nat</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biotechnol</span> 20&#58;1006&#191;1010&#44; 2002&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">60&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12975310&#38;query&#95;hl&#61;18&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Arts GJ&#44; Langemeijer E&#44; Tissingh R&#44; Ma L&#44; Pavliska H&#44; Dokic K&#44; Dooijes R&#44; Mesic E&#44; Clasen R&#44; Michiels F&#44; van der Schueren J&#44; Lambrecht M&#44; Herman S&#44; Brys R&#44; Thys K&#44; Hoffmann M&#44; Tomme P&#44; van Es H</a>&#58; Adenoviral vectors expressing siRNAs for discovery and validation of gene function&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Genome Res</span> 13&#58; 2325-2332&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">61&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;14563560&#38;query&#95;hl&#61;2&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Zhao LJ&#44; Jian H&#44; Zhu H</a>&#58; Specific gene inhibition by adenovirus-mediated expression of small interfering RNA&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Gene</span> 16&#59;316&#58; 137-141&#44; 2003&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">62&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12867952&#38;query&#95;hl&#61;7&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Kay MA&#44; Nakai H</a>&#58; Looking into the safety of AAV vectors&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature</span> 424&#58; 251&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">63&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12620795&#38;query&#95;hl&#61;7&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Thomas CL&#44; Leh V&#44; Lederer C&#44; Maule AJ&#46;</a> Turnip crinkle virus coat protein mediates suppression of RNA silencing in <span class="elsevierStyleItalic">Nicotiana benthamiana</span>&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Virology</span> 306&#58; 33-41&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">64&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;16914898&#38;query&#95;hl&#61;26&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Rodriguez-Barbero A&#44; Obreo J&#44; Alvarez-Munoz P&#44; Pandiella A&#44; Bernabeu C&#44; Lopez-Novoa JM&#46;</a> Endoglin modulation of TGF-beta1-induced collagen synthesis is dependent on ERK1&#47;2 MAPK activation&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Physiol</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biochem</span> 18&#58; 135-142&#44; 2006&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">65&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;16840721&#38;query&#95;hl&#61;26&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Jerkic M&#44; Rivas-Elena JV&#44; Santibanez JF&#44; Prieto M&#44; Rodriguez-Barbero A&#44; Perez-Barriocanal F&#44; Pericacho M&#44; Arevalo M&#44; Vary CP&#44; Letarte M&#44; Bernabeu C&#44; Lopez-Novoa JM</a>&#58; Endoglin regulates cyclooxygenase-2 expression and activity&#46; 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Feng B&#44; Chen G&#44; Zhang X&#44; Li M&#44; Sun H&#44; Liu W&#44; Vladau C&#44; Liu R&#44; Jevnikar AM&#44; Garcia B&#44; Zhong R&#44; Min WP</a>&#58; Preventing renal ischemia-reperfusion injury using small interfering RNA by targeting complement 3 gene&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Am J Transplant</span> 6&#58;2099-2108&#44; 2006&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">68&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12052832&#38;query&#95;hl&#61;12&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Abdelrahim M&#44; Samudio I&#44; Smith R&#44; Burghardt R&#44; Safe S</a>&#58; Small inhibitory RNA duplexes for Sp1 mRNA block basal and estrogen-induced gene expression and cell cycle progression in MCF-7 breast cancer cells&#46; <span class="elsevierStyleItalic">J </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biol</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Chem</span> 277&#58; 28815-28822&#44; 2002&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">69&#46; Silva JM&#44;Hammond SM&#44;  Hannon  GJ&#58;A promising new approach to antiviral therapy&#63; <span class="elsevierStyleItalic">Trends in Molecular Medicine</span> 7&#58; 1040-1046&#44; 2002&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">70&#46;  Capodici  J&#44;  Kariko  K&#44; Weismann D&#46; Inhibition of HIV-1 infection by small interfering RNA-mediated RNA interference <span class="elsevierStyleItalic">&#46;J Immunol</span> 169&#58; 5196-5201&#44; 2002&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">71&#46; Park WS&#44; Miyano-Kurosaki N&#44;  Hayafune  M&#44;  Nakajima  E&#44; Matsuza-ki T&#44;  Shimada  F&#44;  Takaku  H&#58; Prevention of HIV-1 infection in human peripheral blood mononuclear cells by specific RNA interference&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nucleic Acids Research</span> 30&#58; 4830-4835&#44; 2002&#46;        </p> <p class="elsevierStylePara">72&#46;  Shlomai  A&#44; Shaul Y&#58; Inhibition of Hepatitis B virus expression and replication by RNA interference&#46; 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<span class="elsevierStyleItalic">Nat Med</span> 9&#58; 347-351&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">78&#46; Soutschek J&#44; Akinc A&#44; Bramlage B&#44; Charisse K&#44; Constien R&#44; Donoghue M&#44; Elbashir S&#44; Geick A&#44; Hadwiger P&#44; Harborth J&#44; John M&#44; Kesavan V&#44; Lavine G&#44; Pandey RK&#44; Racie T&#44; Rajeev KG&#44; Rohl I&#44; Toudjarska I&#44; Wang G&#44; Wuschko S&#44; Bumcrot D&#44; Koteliansky V&#44; Limmer S&#44; Manoharan M&#44; Vornlocher HP&#58; Therapeutic silencing of an endogenous gene by systemic administration of modified siRNAs&#46;<span class="elsevierStyleItalic">Nature</span> 432&#58; 173-178&#44; 2004&#46;</p> <span class="elsevierStyleBold"><br /></span> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">LEYENDAS DE LAS FIGURAS</span></p> <p class="elsevierStylePara">Figura 1&#46; Portada del art&#237;culo de Napoli y cols&#44; 1990 &#40;referencia 1&#41; &#44; en el que se describe por primera vez el silenciamiento g&#233;nico&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Figura 2&#46; Fenotipos de las flores de los diferentes clones transg&#233;nicos obtenidos y variaciones de la coloraci&#243;n de las flores dentro de una &#250;nica planta &#40;Obtenido de referencia 1&#41;&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Figura 3&#46; Esquema del mecanismo de acci&#243;n del iRNA&#46;</p> <br /> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">TABLA 1&#46; </span>Principales t&#233;rminos mencionados en el art&#237;culo con sus respectivos significados&#46;<span class="elsevierStyleBold"></span></p>  <table > <tbody > <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">iRNA</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">Interference RNA</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">RNA de interferencia</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">dsRNA</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">Doubled Stranded RNA</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">RNA de doble cadena</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">miRNA</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">microRNA</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">microRNA</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">RISC</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">RNA-induced silencing complex</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">Complejo de silenciamiento inducido por mRNA</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">RdRP</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">RNA-dependent RNA polymerase</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">RNA polimerasa dependiente de RNA</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">siRNA</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">Small Interfering RNA</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">RNA de interferencia corto</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">aRNA</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">Aberrant RNA</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">RNA aberrante</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">shRNA</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">Small hairpin RNA</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">Horquilla peque&#241;a de RNA</p></td> </tr> </tbody> </table>  <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p>"
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El ácido ribonucleico de interferencia. ¿Una curiosidad que merece un premio Nóbel o una esperanza terapéutica?
Interference RNA: A curiosity that merits a Nobel price or a future therapeutic tool
Patricia Fernandez Muñoz, Jose Miguel Lopez Novoa
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Dr&#46; Jos&#233; Miguel Lopez-Novoa&#44; Departamento de Fisiolog&#237;a y Farmacolog&#237;a&#44; Universidad de Salamanca&#59; Edificio Departamental&#44; Campus Miguel de Unamuno&#44; 37007 Salamanca&#46; Tel&#58; 923294472&#59; FAX&#58; 923294669&#59; E-mail&#58; jmlnovoa&#64;usal&#46;es</p> <br /> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Introducci&#243;n</span></p> <p class="elsevierStylePara">En palabras del premio N&#243;bel brit&#225;nico Francis Crick el &#191;dogma central de la biolog&#237;a molecular&#191; consiste en que existe un flujo de informaci&#243;n gen&#233;tica desde el genoma&#44; constituido fundamentalmente por el &#225;cido desoxirribonucleico &#40;DNA&#41; nuclear&#44; al &#225;cido ribonucleico mensajero &#40;mRNA&#41; y a las prote&#237;nas&#44; de forma que las instrucciones para sintetizar las prote&#237;nas&#44; contenidas en el DNA&#44; son copiadas al mRNA y &#233;ste sirve como molde para la s&#237;ntesis de las prote&#237;nas en el complejo ribosomas-ret&#237;culo endoplasm&#225;tico&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">Nuestro genoma est&#225; compuesto por alrededor de 30 mil genes&#46; Sin embargo&#44; cada una de nuestras c&#233;lulas usa s&#243;lo una parte de ellos en cada momento&#44; dependiendo del tipo celular y de otras situaciones como son el ciclo celular&#44; la influencia de hormonas o citocinas&#44; etc&#46; La decisi&#243;n de qu&#233; genes son expresados &#40;esto es&#44; qu&#233; nuevas prote&#237;nas se sintetizan&#41; y cuales no&#44; es controlada por la maquinaria que copia DNA a mRNA en un proceso llamado trascripci&#243;n&#46; &#201;ste&#44; a su vez&#44; puede ser modulado por varios factores&#46; Los principios fundamentales de la regulaci&#243;n de la expresi&#243;n gen&#233;tica fueron identificados hace m&#225;s de 40 a&#241;os por los franceses Fran&#231;ois Jacob y Jacques Monod&#44; tambi&#233;n galardonados con el premio N&#243;bel&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Desde principios de los a&#241;os 70 se han desarrollado muchas t&#233;cnicas basadas en los &#225;cidos nucleicos para silenciar genes con un fin terap&#233;utico&#44; entre ellas t&#233;cnicas de DNA antisentido &#40;secuencias de DNA complementarias a los mRNA&#41;&#44; t&#233;cnicas de mutantes dominantes negativos &#40;introducci&#243;n de DNAs que codifican para prote&#237;nas mutadas que ocupan el lugar de las originales pero no ejercen funci&#243;n&#41;&#44; y animales knock-out &#40;en los que se ha eliminado la trascripci&#243;n de un gen concreto&#41;&#44; entre otras&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">Los norteamericanos <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;nytimes&#46;com&#47;aponline&#47;world&#47;AP-Nobel-Medicine&#46;html&#63;hp&#38;ex&#61;1159848000&#38;en&#61;7043d541184b2817&#38;ei&#61;5094&#38;partner&#61;homepage" class="elsevierStyleCrossRefs">Andrew Z&#46; Fire &#40;Profesor en la Facultad de Medicina de la Universidad de Stanford&#41; y Craig C&#46; Mello</a> &#40;investigador del Instituto M&#233;dico Howard Hughes y Profesor de medicina molecular en la Facultad de Medicina de la Universidad de Massachussets&#41; han recibido el premio N&#243;bel en Medicina y Fisiolog&#237;a correspondiente al a&#241;o 2006 por descubrir el mecanismo del RNA de interferencia &#40;iRNA&#41;&#44; una de las aproximaciones al silenciamiento g&#233;nico que m&#225;s &#233;xito ha tenido&#46; El iRNA est&#225; basado en el silenciamiento del mRNA que codifica para la prote&#237;na que queremos eliminar por la degradaci&#243;n de ese mRNA&#46; Mediante esta t&#233;cnica se puede disminuir la expresi&#243;n de la prote&#237;na de inter&#233;s&#44; pero sin llegar a eliminarla&#46; Esta t&#233;cnica se est&#225; utilizando ampliamente en cultivos celulares puesto que es relativamente f&#225;cil de llevar a cabo&#46; Tambi&#233;n se utiliza en organismos vivos&#44; y se replantea utilizarla para el tratamiento de enfermedades basadas en la sobreexpresi&#243;n de un gen&#46; Si se conoce que la expresi&#243;n de un gen concreto causa una enfermedad&#44; se podr&#237;a usar la interferencia de RNA para evitarla&#46; El objetivo de este breve editorial es explicar el mecanismo de funcionamiento del iRNA y su posible utilidad en el campo de la nefrolog&#237;a cl&#237;nica y experimental&#46; En esta aportaci&#243;n mantendremos las siglas en ingl&#233;s&#44; pues son las m&#225;s frecuentemente utilizadas en la literatura y permiten evitar confusiones entre siglas traducidas de diferente forma&#46; Estas siglas en ingl&#233;s y su correspondiente traducci&#243;n al espa&#241;ol se detallan en la tabla 1&#46; </p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">&#191;Qu&#233; es el iRNA&#63;</span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara">Antes del descubrimiento del iRNA&#44; se hab&#237;a descrito en plantas un fen&#243;meno denominado silenciamiento g&#233;nico&#46; En experimentos dise&#241;ados para potenciar el color de las petunias aumentando&#44; mediante ingenier&#237;a gen&#233;tica&#44; el n&#250;mero de copias del gen responsable de la s&#237;ntesis del pigmento&#44; se observ&#243; que se produc&#237;a el efecto contrario&#44; origin&#225;ndose una flor blanca<span class="elsevierStyleSup">1</span> &#40;Figuras 1 y 2&#41;&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">En los a&#241;os siguientes se describi&#243; este fen&#243;meno en otras plantas transg&#233;nicas y en diferentes organismos modelo<span class="elsevierStyleSup">2</span>&#46; Aunque se identific&#243; que este efecto era producido por la inhibici&#243;n de la expresi&#243;n del gen que se intentaba potenciar y que el RNA ten&#237;a un papel fundamental en ello&#44; la explicaci&#243;n molecular del proceso no se conoci&#243; hasta el descubrimiento de Fire y Mello&#46; En 1998 estos investigadores estaban buscando un modo eficiente de silenciar genes como estrategia para estudiar su funci&#243;n en el desarrollo del nematodo <span class="elsevierStyleItalic">C&#46; elegans&#46;</span> Para ello&#44; inyectaron mol&#233;culas de RNA complementario al mRNA del gen que quer&#237;an silenciar &#40;antisentido&#41; en las c&#233;lulas del gusano&#46; Esta t&#233;cnica era por lo general muy poco repetible y los efectos producidos muy modestos&#46; En sus experimentos&#44; ni el uso de la cadena antisentido ni el de la secuencia complementaria a &#233;ste &#40;cadena sentido&#41; produjeron efecto alguno&#46; Inesperadamente&#44; una mezcla de ambas cadenas&#44; sentido y antisentido&#44; en donde estas dos especies moleculares de cadena sencilla hab&#237;an hibridado formando un RNA de doble cadena &#40;dsRNA&#44; de double stranded RNA&#41;&#44; produjo la eliminaci&#243;n casi completa de la expresi&#243;n del gen diana&#46; En su art&#237;culo original&#44; Fire y Mello demuestran que es posible el silenciamiento espec&#237;fico de un gen mediante la introducci&#243;n en la c&#233;lula de un dsRNA que contiene la secuencia hom&#243;loga&#46; Adem&#225;s&#44; proponen que este fen&#243;meno es mediado por un mecanismo end&#243;geno natural&#44; que tiene como consecuencia la degradaci&#243;n del mRNA y que es usado por la c&#233;lula para controlar la expresi&#243;n g&#233;nica&#46; Finalmente&#44; sugieren una conexi&#243;n entre este mecanismo y el fen&#243;meno descrito en plantas<span class="elsevierStyleSup">3</span>&#46; La publicaci&#243;n de este estudio tuvo una excepcional repercusi&#243;n en la comunidad cient&#237;fica&#46; En menos de un a&#241;o se document&#243; la presencia de iRNA en una gran diversidad de organismos modelo&#44; incluyendo tripanosomas&#44; varias especies de planarias&#44; la mosca del vinagre &#40;<span class="elsevierStyleItalic">Drosophyla melanogaster</span>&#41;<span class="elsevierStyleSup">4&#44;5</span>&#44; y el pez-cebra &#40;<span class="elsevierStyleItalic">Danio rerio</span>&#41;<span class="elsevierStyleSup">6-8</span>&#46; Los estudios en mam&#237;feros sufrieron unos a&#241;os de retraso debido a que la introducci&#243;n de fragmentos de dsRNA mayores de 30 nucle&#243;tidos en estas c&#233;lulas activa una reacci&#243;n fisiol&#243;gica que origina la muerte celular&#46; Finalmente&#44; el descubrimiento de que secuencias m&#225;s cortas inducen iRNA sin producir toxicidad demostr&#243; la generalidad de este fen&#243;meno entre los organismos eucariotas&#44; siendo la &#250;nica notable excepci&#243;n la levadura <span class="elsevierStyleItalic">S&#46; cerevisiae&#46;</span> Adem&#225;s&#44; las mutaciones en algunos genes requeridos para el funcionamiento del iRNA producen grandes defectos en el desarrollo&#44; especialmente en tejidos germinales y proliferativos&#44; sugiriendo un enlace entre esta v&#237;a y el desarrollo<span class="elsevierStyleSup">9-16</span>&#46; </p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Silenciamiento end&#243;geno</span></p> <p class="elsevierStylePara">El silenciamiento g&#233;nico mediante iRNA es un proceso que ocurre en las c&#233;lulas de manera natural&#46; La conservaci&#243;n del silenciamiento por acci&#243;n del iRNA es debida a la expresi&#243;n de unos RNAs peque&#241;os no codificantes llamados microRNAs &#40;miRNAs&#41;&#46; Estos miRNAs son cr&#237;ticos para el desarrollo normal y la fisiolog&#237;a de los tejidos en mam&#237;feros&#46; Adem&#225;s&#44; en varios tipos de c&#225;ncer se ha demostrado que existe una p&#233;rdida de expresi&#243;n de miRNAs sugiriendo que esta p&#233;rdida contribuye a la aparici&#243;n de la enfermedad<span class="elsevierStyleSup">17&#44;18</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Inicialmente los miRNAs se transcriben como precursores formados por una cadena de m&#225;s de 2 kb de longitud presentando extensiones de bases que pueden sufrir emparejamiento o adoptar estructuras de horquilla &#40;loop&#41;<span class="elsevierStyleSup">19&#44;20</span>&#46; Adem&#225;s&#44; en las regiones en las que hay un emparejamiento de bases pueden aparecer burbujas&#44; que&#44; junto con las estructuras en horquilla&#44; son importantes&#44; por una parte&#44; para el reconocimiento de los miRNAs por las enzimas celulares y por otra&#44; para la capacidad de esos RNAs para silenciar genes&#46; Los transcritos primarios de miRNA son identificados y procesados en el n&#250;cleo por una RNasa III&#44; llamada Drosha&#44; dando lugar a precursores de aproximadamente 70 nt de longitud&#44; conocidos como pre-miRNAs<span class="elsevierStyleSup">21</span>&#46; Estos salen al citoplasma donde son rotos por una segunda RNasa III llamada Dicer&#46; Dicer convierte los pre-miRNAs en miRNAs maduros de doble cadena de entre 21 y 23 nt de longitud<span class="elsevierStyleSup">22</span>&#46; Estos miRNAs maduros se asocian con un complejo de silenciamiento inducido por mRNA &#40;RISC&#44; de RNA-induced silencing complex&#41;<span class="elsevierStyleSup">23</span>&#46; RISC desenrolla el miRNA y una cadena se asocia con la cadena complementaria del mRNA diana<span class="elsevierStyleSup">24</span>&#46; Dependiendo del grado de homolog&#237;a entre un miRNA y su mRNA diana&#44; los complejos miRNA-RISC inhiben la funci&#243;n g&#233;nica por dos v&#237;as distintas<span class="elsevierStyleSup">25</span>&#58; </p> <p class="elsevierStylePara">a&#41; Si los miRNAs se emparejan imperfectamente se silencia la expresi&#243;n del gen por represi&#243;n de la traducci&#243;n&#44; o sea impidiendo que el mRNA se pueda leer por los ribosomas&#59; </p> <p class="elsevierStylePara">b&#41; Si los miRNAs presenten una secuencia id&#233;ntica al mRNA diana se inhibe la funci&#243;n g&#233;nica por degradaci&#243;n del mRNA<span class="elsevierStyleSup">26&#44;27</span>&#46; </p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Mecanismo de acci&#243;n del iRNA</span></p> <p class="elsevierStylePara">En 1998&#44; Fire y cols&#44; acu&#241;aron el t&#233;rmino iRNA para referirse a un fen&#243;meno de silenciamiento post-transcripcional de la expresi&#243;n g&#233;nica que ocurre en respuesta a la introducci&#243;n de un dsRNA en una c&#233;lula<span class="elsevierStyleSup">3</span>&#46; Adem&#225;s diversos experimentos en <span class="elsevierStyleItalic">C&#46; elegans</span> han demostrado que el iRNA puede propagarse de c&#233;lula a c&#233;lula de la misma manera que en el silenciamiento en plantas<span class="elsevierStyleSup">28</span>&#46; Aunque este silenciamiento sist&#233;mico no se ha encontrado en mam&#237;feros existen prote&#237;nas hom&#243;logas a las que se encuentran implicadas en el silenciamiento en nematodos&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Los mecanismos bioqu&#237;micos implicados se han determinado en diferentes sistemas<span class="elsevierStyleSup">29</span> y parece que muchos de los pasos del proceso est&#225;n bien conservados&#46; Para demostrar que son los mRNAs maduros los que son interferidos se realizaron diversos estudios que demostraron que la secuencia primaria del DNA diana permanece inalterada&#44; que la iniciaci&#243;n y elongaci&#243;n de la trascripci&#243;n no parece estar afectada y que&#44; mientras que los transcritos nucleares est&#225;n presentes&#44; los mRNA citoplasm&#225;ticos est&#225;n completamente ausentes por lo que&#44; al igual que en plantas&#44; los mRNAs diana son degradados principalmente en el citoplasma<span class="elsevierStyleSup">30</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Se han determinado dos mecanismos de silenciamiento por iRNA&#58; silenciamiento a trav&#233;s de RISC&#44; y el silenciamiento a trav&#233;s de RNA-polimerasa dependiente de RNA &#40;RdRP&#44; de RNA-dependent RNA polymerase&#41;&#46;</p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Silenciamiento a trav&#233;s de RISC</span></p> <p class="elsevierStylePara">Cuando en una c&#233;lula aparecen dsRNAs&#44; &#233;stos son rotos&#44; de manera dependiente de ATP&#44; mediante una enzima llamada Dicer&#44; en fragmentos de RNA de doble cadena m&#225;s peque&#241;os llamados RNAs de interferencia cortos <span class="elsevierStyleSup">22&#44;29&#44;31-33</span> &#40;siRNAs&#44; de <span class="elsevierStyleItalic">small interfering RNAs</span>&#41;&#46; Se ha observado en <span class="elsevierStyleItalic">C&#46;elegans</span> que Dicer interacciona con prote&#237;nas rde&#46; Las prote&#237;nas rde se unen a los dsRNAs y se cree que se les presentan a Dicer para su procesamiento<span class="elsevierStyleSup">34</span>&#46; Los mutantes que manifiestan un alto grado de resistencia al efecto del iRNA parece que poseen mutaciones en los genes que codifican las prote&#237;nas rde-1 y rde-4<span class="elsevierStyleSup">35</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Una vez que los siRNAs se forman&#44; son incorporados dentro RISC que&#44; una vez activado y de manera dependiente de ATP&#44; desenrolla los siRNAs manteniendo la cadena antisentido del siRNA<span class="elsevierStyleSup">22&#44;29&#44;31&#44;33&#44;36</span>&#46; Finalmente&#44; el complejo RISC es guiado por la cadena antisentido del siRNA que reconoce el mRNA concreto con su secuencia complementaria&#46; Una vez que est&#225; unido al mRNA&#44; RISC lo rompe en un sitio localizado aproximadamente en el medio de la secuencia hom&#243;loga por lo que se produce su inactivaci&#243;n<span class="elsevierStyleSup">22 </span>&#40;Figura3&#41;&#46;</p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic">Silenciamiento a trav&#233;s de RdRP</span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleItalic"></span></p> <p class="elsevierStylePara">De manera alternativa al silenciamiento a trav&#233;s de RISC&#44; puede existir un silenciamiento a trav&#233;s de RdRP&#46; Existen varias teor&#237;as a cerca de este silenciamiento&#46; Por un lado se piensa que&#44; despu&#233;s de la rotura de los dsRNAs por Dicer&#44; los siRNAs se pueden separar al ser poco estables&#46; Una vez que las dos cadenas de RNA se han separado&#44; la cadena antisentido se une a un mRNA de secuencia complementaria&#46; Esta peque&#241;a cadena act&#250;a como &#191;<span class="elsevierStyleItalic">primer&#191;</span> de una RdRP que sintetiza una cadena complementaria de RNA&#44; de manera que se genera un dsRNA&#46; Este dsRNA es roto en siRNA por la acci&#243;n de la enzima Dicer pudiendo comenzar el proceso&#44; bien por este tipo de silenciamiento o bien por silenciamiento a trav&#233;s de RISC&#46; Generalmente los siRNAs son muy espec&#237;ficos&#44; sin embargo la elongaci&#243;n de los siRNAs usando los mRNAs como molde puede llevar a una interferencia no espec&#237;fica por la aparici&#243;n de secuencias hom&#243;logas a otros mRNAs&#44; generando un iRNA transitorio&#46; Este fen&#243;meno es particular de plantas y nematodos&#46; Otro modelo propueso es que tras el corte del mRNA por parte del complejo RISC&#44; se produce un RNA aberrante &#40;aRNA&#41; que es utilizado por una RdRP para sintetizar la cadena complementaria obteni&#233;ndose de nuevo un dsRNA que puede ser cortado por Dicer&#46; Esto puede llevarse a cabo porque las RdRPs pueden sintetizar RNA sin necesidad de un primer &#40;figura 3&#41;&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">El descubrimiento de estas prote&#237;nas en el iRNA y el silenciamiento g&#233;nico post-transcripcional proporciona una posible explicaci&#243;n para la alta eficacia de los dsRNAs en el silenciamiento&#44; ya que solo se requieren unas pocas mol&#233;culas de dsRNA para degradar una gran poblaci&#243;n de mRNAs<span class="elsevierStyleSup">3</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">iRNA en mam&#237;feros&#46;</span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara">El silenciamiento en mam&#237;feros mediante el iRNA parece ser llevado a cabo mediante RISC puesto que no se ha encontrado una prote&#237;na hom&#243;loga a la RdRP&#46; Tampoco se ha detectado ning&#250;n sistema de iRNA transitorio en c&#233;lulas de mam&#237;fero&#46; Esto puede ser debido a que la introducci&#243;n de grandes dsRNAs en c&#233;lulas de mam&#237;fero produce una disminuci&#243;n de la transcripci&#243;n y de la traducci&#243;n&#44; en parte debida a la activaci&#243;n de la prote&#237;na quinasa dependiente de dsRNA<span class="elsevierStyleSup">37</span> &#40;PKR&#44; de dsRNA activated protein kinase&#41;&#46; La PKR activada fosforila la subunidad peque&#241;a del factor de iniciaci&#243;n eucariota 2 alfa &#40;eIF2&#945;&#41;&#44; disminuyendo la traducci&#243;n&#46; Adem&#225;s&#44; PKR tambi&#233;n promueve la s&#237;ntesis de 2&#191;-5&#191;-&#225;cido poliaden&#237;lico&#44; que activa la RNasa L de forma no espec&#237;fica&#46; Estos fen&#243;menos colectivos pueden alterar dr&#225;sticamente el metabolismo celular y generalmente activan v&#237;as de apoptosis<span class="elsevierStyleSup">38</span>&#46; Esta respuesta al estr&#233;s podr&#237;a haberse desarrollado como una defensa contra las infecciones virales de forma que se bloquea la replicaci&#243;n viral impidiendo la s&#237;ntesis de prote&#237;nas y activando la apoptosis en las c&#233;lulas infectadas<span class="elsevierStyleSup">39</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">FUTURO TERAP&#201;UTICO DEL iRNA</span></p> <p class="elsevierStylePara">La supresi&#243;n de la expresi&#243;n de genes por iRNA es generalmente un fen&#243;meno transitorio<span class="elsevierStyleSup">40</span>&#46; El silenciamiento g&#233;nico en c&#233;lulas de mam&#237;fero est&#225; limitado por el n&#250;mero de mol&#233;culas de siRNA que se introducen&#46; El n&#250;mero de siRNAs decrece con el tiempo debido a la diluci&#243;n que se produce cuando las c&#233;lulas se dividen y a la degradaci&#243;n de las enzimas celulares&#46; Una vez que los siRNAs son introducidos la expresi&#243;n g&#233;nica se recupera despu&#233;s de entre 96 y 120 horas&#44; o de entre 3 y 5 divisiones celulares despu&#233;s de la transfecci&#243;n<span class="elsevierStyleSup">41</span>&#46; Los primeros esfuerzos se enfocaron sobre la administraci&#243;n directa de siRNAs sint&#233;ticos en animales&#44; desarrollando tres m&#233;todos principales que parecen ser los que m&#225;s eficacia tienen&#58; a&#41; la inyecci&#243;n intravenosa de siRNAs&#44; creando un &#191;back-flow&#191; en el sistema venoso&#44; que fuerza a la soluci&#243;n del siRNA a introducirse en diversos &#243;rganos<span class="elsevierStyleSup">42&#44;43</span>&#59; b&#41; la inyecci&#243;n de peque&#241;os vol&#250;menes de siRNAs empaquetados en liposomas cati&#243;nicos&#44; observ&#225;ndose el silenciamiento en tejidos con un alto flujo sangu&#237;neo<span class="elsevierStyleSup">44</span>&#59; c&#41; la electroporaci&#243;n de siRNAs directamente en tejidos y &#243;rganos<span class="elsevierStyleSup">45-48</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">La soluci&#243;n para obtener un silenciamiento g&#233;nico estable a trav&#233;s del iRNA ha sido el desarrollo de sistemas de expresi&#243;n que producen siRNAs&#46; Esto fue llevado a cabo por varios grupos<span class="elsevierStyleSup">41&#44;49&#44;50 </span>que utilizaron el promotor U6 o H1&#44; para expresar una horquilla peque&#241;a de RNA &#40;shRNA&#44; de small hairpin RNA&#41;&#46; Los shRNAs pueden ser procesados por Dicer para producir siRNAs&#46; Varios grupos han utilizado pl&#225;smidos basados en shRNAs para obtener un silenciamiento <span class="elsevierStyleItalic">in vivo</span> de mayor duraci&#243;n<span class="elsevierStyleSup">51</span>&#46; Tambi&#233;n se han utilizado vectores virales para la expresi&#243;n de shRNAs en las c&#233;lulas&#46; As&#237; se han realizado estudios con retrovirus<span class="elsevierStyleSup">52-57</span>&#44; lentivirus<span class="elsevierStyleSup">52&#44;55&#44;57&#44;58</span>&#44; adenovirus<span class="elsevierStyleSup">59-61</span> y virus asociados a adenovirus<span class="elsevierStyleSup">62&#44;63</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">Aplicaciones pr&#225;cticas del iRNA </span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara">La tecnolog&#237;a derivada del iRNA ha revolucionado la forma en que podemos analizar la funci&#243;n de los genes&#46; Ahora podemos llevar a cabo estudios de silenciamiento g&#233;nico de una manera sencilla y eficiente&#46; En ellos introducimos en las c&#233;lulas dsRNAs o siRNAs dise&#241;ados artificialmente para silenciar un gen determinado&#46; Esta tecnolog&#237;a representa una oportunidad &#250;nica para identificar genes implicados en cualquier proceso biol&#243;gico o enfermedad&#46; Adem&#225;s&#44; debido a su sencillez&#44; estos estudios pueden ser realizados en miles de genes a la vez&#44; d&#225;ndonos una perspectiva global del problema biol&#243;gico que se estudia&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">Por ejemplo&#44; nosotros estamos estudiando el efecto que tiene el silenciamiento del gen de la endoglina&#44; una mol&#233;cula que parece regular el efecto profibr&#243;tico del factor de crecimiento transformante beta &#40;TGF-beta&#41;&#44; sobre la s&#237;ntesis de matriz extracelular<span class="elsevierStyleSup">64</span>&#46; Nuestros resultados preliminares parecen demostrar que el silenciamiento de endoglina con un siRNA espec&#237;fico modifica la producci&#243;n de matriz extracelular por las c&#233;lulas mesangiales &#40;Patricia &#193;lvarez-Mu&#241;oz y Jos&#233; M&#46; Lopez-Novoa&#59; resultados sin publicar&#41;&#46; Asimismo&#44; en un estudio en el que trat&#225;bamos de relacionar la expresi&#243;n de endoglina con la regulaci&#243;n de la expresi&#243;n de la ciclooxigenasa -2 &#40;COX-2&#41;&#44; la transfecci&#243;n de las c&#233;lulas endoteliales con un siRNA para endoglina aument&#243; la expresi&#243;n de COX-2 tanto en condiciones basales como en respuesta a TGF-beta1<span class="elsevierStyleSup">65</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Otro ejemplo de un trabajo muy recientemente publicado en Kidney International&#44; escogido entre muchos trabajos del mismo tipo&#44; demuestra que el silenciamiento con siRNA del gen ELMO1 &#40;de engulfment and cell motility 1&#41;&#44; un gen de susceptibilidad a la nefropat&#237;a diab&#233;tica y que se hiperexpresa en diversos modelos animales de fibrosis renal&#44; suprim&#237;a la expresi&#243;n de fibronectina que se observaba en c&#233;lulas que expresan este gen&#44; sugiriendo que la expresi&#243;n de ELMO1 contribuye al desarrollo y progresi&#243;n de la nefropat&#237;a diab&#233;tica a trav&#233;s de la alteraci&#243;n de la s&#237;ntesis de matriz extracelular<span class="elsevierStyleSup">66</span>&#46; Otro ejemplo es un trabajo muy reciente publicado en American Journal of Transplantation en el que demuestran que el silenciamiento con siRNA de C3&#44; el componente central de todas las v&#237;as de activaci&#243;n del complemento&#44; es efectivo inhibiendo la expresi&#243;n de C3 en un modelo de isquemia&#47;reperfusi&#243;n renal experimental en rat&#243;n&#44; reduciendo el da&#241;o renal&#44; la producci&#243;n del factor de necrosis tumoral alfa &#40;tumoral necrosis factor alpha&#59; TNF-alpha &#41; y la mortalidad inducida por la isquemia&#47;reperfusi&#243;n&#46; Los autores sugieren que el uso del siRNA representa una nueva posibilidad terap&#233;utica en la necrosis tubular aguda o en la preservaci&#243;n de &#243;rganos para trasplante<span class="elsevierStyleSup">67</span>&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">Aparte de su incuestionable relevancia como herramienta de investigaci&#243;n&#44; esta tecnolog&#237;a est&#225; empezando a ser aplicada a la terapia&#46; As&#237;&#44; se trabaja para que en un futuro pueda usarse para silenciar&#44; por ejemplo&#44; genes alterados en enfermedades tumorales<span class="elsevierStyleSup">68</span>&#44; o genes virales en pacientes con infecciones v&#237;ricas&#46; Inhibiendo la expresi&#243;n de genes virales involucrados en la replicaci&#243;n&#44; es posible inhibir &#233;sta dentro de las c&#233;lulas y&#44; por lo tanto&#44; la capacidad de los virus para multiplicarse&#44; lisar las c&#233;lulas e invadir otras&#46; Hay varios estudios que describen el uso del iRNA para inhibir la replicaci&#243;n del VIH-1 y del virus de la hepatitis B<span class="elsevierStyleSup">69-72</span>&#46; Giladi y cols &#40;2003&#41;<span class="elsevierStyleSup">73</span> describieron el uso de los siRNA para silenciar tres secuencias diferentes de mRNA <span class="elsevierStyleItalic">in vivo </span>en ratones infectados con el virus de la hepatitis B<span class="elsevierStyleItalic">&#46;</span> Los resultados oscilaron entre inhibiciones del 60&#37; al 90&#37; dependiendo de las secuencias de siRNA utilizadas y la prote&#237;na silenciada&#46; Tambi&#233;n se la planteado el uso del iRNA contra la infecci&#243;n por el virus de la hepatitis C<span class="elsevierStyleSup">74&#44;75</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Otra diana terap&#233;utica &#40;entre las muchas posibles&#41; son los genes causantes de los niveles elevados de colesterol en sangre&#46; En relaci&#243;n con esto&#44; se ha publicado recientemente en Nature que el silenciamiento del gen de la apolipoproteina B &#40;ApoB&#41; in primates mediante la inyecci&#243;n intravenosa de siRNAs espec&#237;ficos para ApoB y encapsulados en part&#237;culas estables un complejo &#225;cidos nucleicos-l&#237;pidos&#44; dio lugar a reducciones significativas en los niveles circulantes de ApoB&#44; colesterol y LDL&#44; que se observaron desde 24 horas despu&#233;s de la inyecci&#243;n hasta 11 d&#237;as despu&#233;s&#44; lo que demuestra la eficacia y la larga duraci&#243;n de este tipo de tratamiento en animales muy parecidos al hombre<span class="elsevierStyleSup">76</span>&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">En modelos animales de insuficiencia hep&#225;tica aguda debida a inducci&#243;n de la apoptosis de los hepatocitos por agonistas de Fas&#44; el tratamiento con siRNA contra el gen de Fas protegi&#243; a los animales contra la hepatitis fulminante<span class="elsevierStyleSup">77</span>&#46; Aunque no conozcamos que se hayan publicado hasta la fecha estudios cl&#237;nicos rigurosos basados en la terapia g&#233;nica&#44; hay compa&#241;&#237;as como &#191;siRNA Therapeutics&#191; y &#191;Alnylam Pharmaceuticals&#191; que est&#225;n realizando estudios cl&#237;nicos preliminaries desde el a&#241;o 2005<span class="elsevierStyleSup">78</span>&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">En resumen&#44; el descubrimiento del iRNA ha expandido enormemente el conocimiento cient&#237;fico sobre los mecanismos implicados en la regulaci&#243;n g&#233;nica&#46; Adem&#225;s&#44; el desarrollo de tecnolog&#237;as basadas en el iRNA nos ha equipado a los investigadores con poderos&#237;simas herramientas experimentales para estudiar la funci&#243;n g&#233;nica&#46; La adaptaci&#243;n de esta tecnolog&#237;a a la terapia de diferentes tipos de patolog&#237;as&#44; aunque a&#250;n en desarrollo&#44; ha abierto expectativas terap&#233;uticas sin precedentes&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Agradecimientos</p> <p class="elsevierStylePara">Patricia &#193;lvarez-Mu&#241;oz es becaria FPU del Ministerio de Educaci&#243;n y Ciencia Los estudios de nuestro laboratorio han sido financiados por el proyecto BFU2004-00285 del Ministerio de Educaci&#243;n y Ciencia y SA22&#47;03 de la Junta de Castilla y Leon</p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">BIBLIOGRAF&#205;A</span></p> <p class="elsevierStylePara">1&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;12354959&#38;query&#95;hl&#61;17" class="elsevierStyleCrossRefs">Napoli C&#44; Lemieux C&#44; Jorgensen R</a>&#58; Introduction of a Chimeric  Chalcone  Synthase  Gene into Petunia Results in Reversible Co-Suppression of Homologous  Genes in trans&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Plant Cell</span> Apr&#59;2&#58; 279-289&#44; 1990&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">2&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;8843939&#38;query&#95;hl&#61;26" class="elsevierStyleCrossRefs">Jorgensen RA&#44; Cluster PD&#44; English J&#44; Que Q&#44; Napoli CA</a>&#58; Chalcone synthase cosuppression phenotypes in petunia flowers&#58; comparison of sense vs&#46; antisense constructs and single-copy vs&#46; complex T-DNA sequences&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Plant Mol Biol</span> Aug&#59;31&#58; 957-73&#44; 1993&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">3&#46; Fire A&#44; Xu S&#44; Montgomery MK&#44; Kostas SA&#44; Driver SE&#44; Mello CC&#58; Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in <span class="elsevierStyleItalic">Caenorhabditis</span> <span class="elsevierStyleItalic">elegans&#46; Nature </span>391&#58; 806&#191;11&#44; 1998&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">4&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;9875855&#38;query&#95;hl&#61;22" class="elsevierStyleCrossRefs">Kennerdell JR&#44; Carthew RW</a>&#58; Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell</span> Dec 23&#59;95&#58; 1017-26&#44; 1998&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">5&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;10932163&#38;query&#95;hl&#61;23" class="elsevierStyleCrossRefs">Kennerdell JR&#44; Carthew RW</a>&#58; Heritable gene silencing in Drosophila using double-stranded RNA&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Nat</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biotechnol</span> Aug&#59;18&#58; 896-8&#44; 2000&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">6&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;10625563&#38;query&#95;hl&#61;27" class="elsevierStyleCrossRefs">Li YX&#44; Farrell MJ&#44; Liu R&#44; Mohanty N&#44; Kirby ML</a>&#58; Double-stranded RNA injection produces null phenotypes in zebrafish&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Dev Biol</span>&#46; Jan 15&#59;217&#58; 394-405&#44; 2000&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">7&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;11917028&#38;query&#95;hl&#61;24" class="elsevierStyleCrossRefs">Zhou Y&#44; Ching YP&#44; Kok KH&#44; Kung HF&#44; Jin DY</a>&#58; Post-transcriptional suppression of gene expression in Xenopus embryos by small interfering RNA&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nucleic Acids Res</span> Apr 1&#59;30&#58;1664-1669&#44; 2002&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">8&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;11587535&#38;query&#95;hl&#61;33" class="elsevierStyleCrossRefs">Svoboda P&#44; Stein P&#44; Schultz RM&#46;</a> RNAi in mouse oocytes and preimplantation embryos&#58; effectiveness of hairpin dsRNA&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Biochem</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biophys</span> <span class="elsevierStyleItalic"> Res Commun</span> Oct 12&#59;287&#58; 1099-1104&#44; 2001&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">9&#46;  Wilson  JE&#44;  Connell  JE&#44; Macdonald PM&#58; Aubergine enhances  oskar translation in the <span class="elsevierStyleItalic">Drosophila </span>ovary&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Development </span>122&#58; 1631-1639&#44; 1996&#46;     </p> <p class="elsevierStylePara">10&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;9427751&#38;query&#95;hl&#61;17&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Bohmert K&#44; Camus I&#44; Bellini C&#44; Bouchez D&#44; Caboche M&#44; Benning C</a>&#58; AGO1 defines a novel locus of Arabidopsis controlling leaf development&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">EMBO</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">J</span> 17&#58; 170-180&#44; 1998&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">11&#46; Cox DN&#44;  Chao  A&#44; Baker J&#44;  Chang  L&#44;  Qiao  D&#44;  Lin  H&#58; A novel class of evolutionarily conserved genes defined by piwi are essential for stem cell self-renewal&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Gen Dev</span> 12&#58; 3715-3727&#44; 1998&#46;        </p> <p class="elsevierStylePara">12&#46; Lynn K&#44;  Fernandez A&#44;  Aida M&#44; Sedbrook J&#44; Tasaka M&#44;  Masson  P&#44;Barton MK&#58; The PINHEAD&#47;ZWILLE gene acts pleiotropically in <span class="elsevierStyleItalic">Arabidopsis </span>development and has overlapping functions with the ARGONAUTE1 gene&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Development</span> 126&#58; 469-481&#44; 1999&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">13&#46;  Cerutti  L&#44; Mian N&#44;  Bateman  A&#58; Domains in gene silencing and cell differentiation proteins&#58; the novel  PAZ domain and redefinition of the Piwi domain&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Trends </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biochem</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>25&#58; 481-482&#44; 2000&#46;       </p> <p class="elsevierStylePara">14&#46;  Fagard  M&#44;  Boutet  S&#44; Morel J-B&#44; Bellini C&#44;  Vaucheret  H&#58; AGO1&#44; QDE-2&#44; and RDE-1 are related proteins required for post-transcriptional gene silencing in plants&#44; quelling in fungi&#44; and RNA interference in animals&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> USA</span> 97&#58;11650&#191;11654&#44; 2000&#46;          </p> <p class="elsevierStylePara">15&#46;  Smardon  A&#44;  Spoerke  J&#44;  Stacey  S&#44; Klein M&#44;  Mackin  N&#44; Maine E&#58; EGO-1 is related to RNA-directed RNA polymerase and functions in germ-line development and RNA interference in <span class="elsevierStyleItalic">C&#46; elegans</span>&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Curr</span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biol</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>10&#58; 169-178&#44; 2000&#46;          </p> <p class="elsevierStylePara">16&#46; Schmidt A&#44; Palumbo G&#44; Bozzetti MP&#44; Tritto P&#44; Pimpinelli S&#44; Schafer U&#58; Genetic and molecular characterization of sting&#44; a gene involved in crystal formation and meiotic drive in the male germ line of <span class="elsevierStyleItalic">Drosophila melanogaster</span>&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Genetics </span>151&#58; 749-760&#44; 1999&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">17&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12434020&#38;query&#95;hl&#61;11&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Calin GA&#44; Dumitru CD&#44; Shimizu M&#44; Bichi R&#44; Zupo S&#44; Noch E&#44; Aldler H&#44; Rattan S&#44; Keating M&#44; Rai K&#44; Rassenti L&#44; Kipps T&#44; Negrini M&#44; Bullrich F&#44; Croce CM</a>&#58; Frequent deletions and down-regulation of micro- RNA genes miR15 and miR16 at 13q14 in chronic lymphocytic leukemia&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> U S A</span> 99&#58; 15524-9&#46; 2002&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">18&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;14973191&#38;query&#95;hl&#61;12&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Calin GA&#44; Sevignani C&#44; Dumitru CD&#44; Hyslop T&#44; Noch E&#44; Yendamuri S&#44; Shimizu M&#44; Rattan S&#44; Bullrich F&#44; Negrini M&#44; Croce CM</a>&#58; Human microRNA genes are frequently located at fragile sites and genomic regions involved in cancers&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span> <span class="elsevierStyleItalic">USA</span> 101&#58; 2999-3004&#44; 2004&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">19&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12007417&#38;query&#95;hl&#61;13&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Lagos-Quintana M&#44; Rauhut R&#44; Yalcin A&#44; Meyer J&#44; Lendeckel W&#44; Tuschl T</a>&#58; Identification of tissue specific microRNAs from mouse&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Curr</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biol</span> 12&#58; 735-7399&#44; 2002&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">20&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;11981565&#38;query&#95;hl&#61;15&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Lee NS&#44; Dohjima T&#44; Bauer G&#44; Li H&#44; Li MJ&#44; Ehsani A&#44; Salvaterra P&#44; Rossi J</a>&#58; Expression of small interfering RNAs targeted against HIV-1 rev transcripts in human cells&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Nat</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biotechnol</span> 20&#58; 500-505&#44; 2002&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">21&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;14508493&#38;query&#95;hl&#61;10&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Lee Y&#44; Ahn C&#44; Han J&#44; Choi H&#44; Kim J&#44; Yim J&#44; Lee J&#44; Provost P&#44; Radmark O&#44; Kim S&#44; Kim VN</a>&#58; The nuclear RNase III Drosha initiates microRNA processing&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature</span> 425&#58; 415-419&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">22&#46; Bernstein E&#44; Caudy AA&#44; Hammond SM&#44;  Hannon  GJ&#58; Role for a bidentate ribonuclease in the initiation step of RNA interference&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature </span>409&#58; 363&#191;66&#44; 2001&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">23&#46; Hutvagner G&#44; Zamore PD&#58; RNAi&#58; nature abhors a double-strand&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Curr Opin</span> <span class="elsevierStyleItalic">Genet Dev </span>12&#58; 225&#191;32&#44; 2002&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">24&#46; Martinez J&#44; Patkaniowska A&#44; Urlaub H&#44; Luhrmann R&#44; Tuschl T&#58; Singlestranded antisense siRNAs guide target RNA cleavage in RNAi&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell </span>110&#58; 563&#191;74&#44; 2002&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">25&#46;  Bartel  DP&#58; 2004&#46; MicroRNAs&#58; genomics&#44; biogenesis&#44; mechanism&#44; and function&#46; <span class="elsevierStyleItalic"><a href="javascript&#58;AL&#95;get&#40;this&#44;&#37;20&#39;jour&#39;&#44;&#37;20&#39;Cell&#46;&#39;&#41;&#59;" class="elsevierStyleCrossRefs">Cell</a></span> 116&#58; 281-97&#44; 2004&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">26&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;11461699&#38;query&#95;hl&#61;3&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Grishok A&#44; Pasquinelli AE&#44; Conte D&#44; Li N&#44; Parrish S&#44; Ha I&#44; Baillie DL&#44; Fire A&#44; Ruvkun G&#44; Mello CC</a>&#58;  Genes and mechanisms related to RNA interference regulate expression of the small temporal RNAs that control <span class="elsevierStyleItalic">C&#46; elegans </span>developmental timing&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell </span>106&#58;23&#191;34&#44; 2001&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">27&#46;  Hutvagner  G&#44;  McLachlan  J&#44;  Pasquinelli  AE&#44;  Balint  E&#44;  Tuschl  T&#44; Zamore PD&#58; A cellular function for the RNAinterference enzyme Dicer in the maturation of the let-7 small temporal RNA&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Science </span>293&#58; 834&#191;38&#44; 2001&#46;          </p> <p class="elsevierStylePara">28&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;10461204&#38;query&#95;hl&#61;13" class="elsevierStyleCrossRefs">Fire A</a>&#58; RNA-triggered gene silencing&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Trends Genet </span>15&#58; 358-63&#44; 1999&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">29&#46; Hammond SM&#44; Bernstein E&#44; Beach D&#44;  Hannon  GJ&#58; An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing in <span class="elsevierStyleItalic">Drosophila </span>cells&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature</span> 404&#58; 293-296&#44; 2000&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">30&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;9860998&#38;query&#95;hl&#61;8" class="elsevierStyleCrossRefs">Montgomery MK&#44; Xu S&#44; Fire A</a>&#58; RNA as a target of double-stranded RNA-mediated genetic interference in Caenorhabditis elegans&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> U S A</span> 95&#58; 15502-15507&#44; 1998&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">31&#46;  Elbashir  SM&#44;  Harborth  J&#44;  Lendeckel  W&#44;  Yalcin  A&#44; Weber K&#44;  Tuschl  T&#58; Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature </span>411&#58; 494&#191;98&#44; 2001&#46;          </p> <p class="elsevierStylePara">32&#44; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;10542148&#38;query&#95;hl&#61;20" class="elsevierStyleCrossRefs">Hamilton AJ&#44; Baulcombe DC</a>&#58; A species of small antisense RNA in posttranscriptional gene silencing in plants&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Science</span> 286&#58; 950-2&#44; 1999&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">33&#46;  Zamore  P&#44;  Tuschl  T&#44; Sharp P&#44;  Bartel  D&#58; RNAi&#58; double-stranded RNA directs the ATP dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell</span> 101&#58; 25-33&#44; 2000&#46;      </p> <p class="elsevierStylePara">34&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;12110183&#38;query&#95;hl&#61;17" class="elsevierStyleCrossRefs">Tabara H&#44; Yigit E&#44; Siomi H&#44; Mello CC</a>&#58; The dsRNA binding protein RDE-4 interacts with RDE-1&#44; DCR-1&#44; and a DExH-box helicase to direct RNAi in C&#46; elegans&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell</span> 109&#58; 861-71&#44; 2002&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">35&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;10535731&#38;query&#95;hl&#61;8&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Tabara H&#44; Sarkissian M&#44; Kelly WG&#44; Fleenor J&#44; Grishok A&#44; Timmons L&#44; Fire A&#44; Mello CC</a>&#58; The rde-1 gene&#44; RNA interference&#44; and transposon silencing in C&#46; elegans&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell</span> 99&#58; 123-32&#44; 1999&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">36&#46;  Nyk&#228;nen  A&#44;  Haley  B&#44; Zamore PD&#58; ATP requirements and small interfering RNA structure in the RNA interference pathway&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell</span> 107&#58; 309-321&#44; 2001&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">37&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;9191145&#38;query&#95;hl&#61;44&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Williams BR</a>&#58; Role of the double-stranded RNA-activated protein kinase &#40;PKR&#41; in cell regulation&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Biochem</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Soc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Trans</span> 25&#58; 509-513&#44; 1997&#46;   </p> <p class="elsevierStylePara">38&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;11232238&#38;query&#95;hl&#61;7" class="elsevierStyleCrossRefs">Gil J&#44; Esteban M</a>&#58; Induction of apoptosis by the dsRNA-dependent protein kinase &#40;PKR&#41;&#58; mechanism of action&#46;<span class="elsevierStyleItalic"> Apoptosis</span> 5&#58; 107-114&#44; 2000&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">39&#46; Stark GR&#44;  Kerr  IM&#44; Williams BR&#44;Silverman RH&#44; Schreiber RD&#58; How cells respond to interferons&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Annu </span> <span class="elsevierStyleItalic">Rev</span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biochem</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>67&#58; 227&#191;264&#44; 1998&#46;   </p> <p class="elsevierStylePara">40&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;cmd&#61;Retrieve&#38;db&#61;pubmed&#38;dopt&#61;Abstract&#38;list&#95;uids&#61;11604515&#38;query&#95;hl&#61;6" class="elsevierStyleCrossRefs">Yang S&#44; Tutton S&#44; Pierce E&#44; Yoon K</a>&#58; Specific double-stranded RNA interference in undifferentiated mouse embryonic stem cells&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Mol Cell Biol</span> 21&#58; 7807-7816&#44; 2001&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">41&#46;  Brummelkamp  TR&#44; Bernards R&#44;  Agami  R&#58; A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian cells&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Science </span>296&#58;550&#191;553&#46; 2002&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">42&#46; McCaffrey AP&#44; Meuse L&#44; Pham TT&#44; Conklin DS&#44; Hannon GJ&#44; KayMA&#58; RNA interference in adult mice&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature </span>418&#58; 38&#191;39&#44; 2002&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">43&#46; Lewis DL&#44; Hagstrom JE&#44; Loomis AG&#44; Wolff JA&#44;  Herweijer  H&#58; Efficient delivery of siRNA for inhibition of gene expression in postnatal mice&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Nat</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Genet</span> 32&#58; 107&#191;108&#44; 2002&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">44&#46; Sorensen DR&#44;  Leirdal  M&#44;  Sioud  M&#58;  Gene silencing by systemic delivery of synthetic siRNAs in adult mice&#46; <span class="elsevierStyleItalic">J Mol Biol </span>327&#58; 761&#191;766&#44; 2003&#46;     </p> <p class="elsevierStylePara">45&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;14716682&#38;query&#95;hl&#61;10&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Kishida T&#44; Asada H&#44; Gojo S&#44; Ohashi S&#44; Shin-Ya M&#44; Yasutomi K&#44; Terauchi R&#44; Takahashi KA&#44; Kubo T&#44; Imanishi J&#44; Mazda O</a>&#58; Sequencespecific gene silencing in murine muscle induced by electroporation-mediated transfer of short interfering RNA&#46; <span class="elsevierStyleItalic">J </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Gene</span> <span class="elsevierStyleItalic">Med </span>6&#58; 105&#191;110&#44; 2004&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">46&#46; Konishi Y&#44;  Stegmuller  J&#44;  Matsuda  T&#44;  Bonni  S&#44;  Bonni  A&#58; Cdh1-APC controls axonal growth and patterning in the mammalian brain&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Science </span>303&#58; 1026&#191;1030&#44; 2004&#46;        </p> <p class="elsevierStylePara">47&#46; Kong XC&#44; Barzaghi P&#44; Ruegg MA&#58; Inhibition of synapse assembly in mammalian muscle in vivo by RNA interference&#46; <span class="elsevierStyleItalic">EMBO Rep </span>5&#58; 183&#191;188&#44; 2004&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">48&#46;  Matsuda  T&#44; Cepko CL&#58; Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Proc&#46; Natl&#46;Acad&#46; Sci&#46; USA </span>101&#58; 16&#191;22&#44; 2004&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">49&#46; Sui G&#44; Soohoo C&#44; Affar elB&#44; Gay F&#44; Shi Y&#44; Forrester WC&#58; A DNAvector-based RNAi technology to suppress gene expression in mammalian cells&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span> <span class="elsevierStyleItalic">USA </span>99&#58; 5515&#191;5520&#44; 2002&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">50&#46; Paddison PJ&#44; Caudy AA&#44; Hannon GJ&#58; Stable suppression of gene expression by RNAi in mammalian cells&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> USA </span>99&#58; 1443&#191;1448&#44; 2002&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">51&#46;  Zhang  L&#44; Yang N&#44; Mohamed-Hadley A&#44; Rubin SC&#44;  Coukos  G&#58;  Vectorbased  RNAi&#44; a novel tool for isoformspecific knock-down of VEGF and anti-angiogenesis gene therapy of cancer&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Biochem</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biophys</span> <span class="elsevierStyleItalic"> Res Commun</span> 303&#58; 1169&#191;1178&#44; 2003&#46;        </p> <p class="elsevierStylePara">52&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12551891&#38;query&#95;hl&#61;5&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Dirac AM&#44; Bernards R</a>&#58; Reversal of senescence in mouse fibroblasts through lentiviral suppression of p53&#46; <span class="elsevierStyleItalic">J </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biol</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Chem</span> Apr 4&#59;278&#40;14&#41;&#58; 11731-11734&#44; 2003&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">53&#46;  Hemann  MT&#44;  Fridman  JS&#44;  Zilfou  JT&#44;  Hernando  E&#44;  Paddison  PJ&#44; Cordon-Cardo C&#44;  Hannon  GJ&#44; Lowe SW&#58; An epi-allelic series of p53 hypomorphs created by stable RNAi produces distinct tumor phenotypes in vivo&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Nat</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Genet</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>33&#58; 396&#191;400&#44; 2003&#46;              </p> <p class="elsevierStylePara">54&#46; Rubinson DA&#44; Dillon CP&#44; Kwiatkowski AV&#44; Sievers C&#44; Yang L&#44; Kopinja J&#44; Rooney DL&#44; Ihrig MM&#44; McManus MT&#44; Gertler FB&#44; Scott ML&#44; Van Parijs L&#58; A lentivirus-based system to functionally silence genes in primary mammalian cells&#44; stem cells and transgenic mice by RNA interference&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Nat&#46;</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Genet</span> <span class="elsevierStyleItalic">&#46; </span>33&#58; 401&#191;406&#44; 2003&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">55&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12649500&#38;query&#95;hl&#61;9&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Stewart SA&#44; Dykxhoorn DM&#44; Palliser D&#44; Mizuno H&#44; Yu EY&#44; An DS&#44; Sabatini DM&#44; Chen IS&#44; Hahn WC&#44; Sharp PA&#44; Weinberg RA&#44; Novina CD</a>&#58; Lentivirus-delivered stable gene silencing by RNAi in primary cells&#46; <span class="elsevierStyleItalic">RNA</span> 9&#58; 493-501&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">56&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12552109&#38;query&#95;hl&#61;14&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Tiscornia G&#44; Singer O&#44; Ikawa M&#44; Verma IM</a>&#58; A general method for gene knockdown in mice by using lentiviral vectors expressing small interfering RNA&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Proc</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Natl</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Acad</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Sci</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span> <span class="elsevierStyleItalic">USA</span> 100&#58; 1844-1848&#44; 2003&#46;    </p> <p class="elsevierStylePara">57&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;14634645&#38;query&#95;hl&#61;17&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Hommel JD&#44; Sears RM&#44; Georgescu D&#44; Simmons DL&#44; DiLeone RJ</a>&#58; Local gene knockdown in the brain using viral-mediated RNA interference&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nat Med</span> 9&#58; 1539-1544&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">58&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12542850&#38;query&#95;hl&#61;4&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Abbas-Terki T&#44; Blanco-Bose W&#44; Deglon N&#44; Pralong W&#44; Aebischer P</a>&#58; Lentiviral-mediated RNA interference&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Hum </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Gene</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Ther</span> 13&#58; 2197-2201&#44; 2002&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">59&#46; Xia H&#44; Mao Q&#44; Paulson HL&#44; Davidson BL&#58; siRNA-mediated gene silencing in vitro and in vivo&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Nat</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biotechnol</span> 20&#58;1006&#191;1010&#44; 2002&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">60&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12975310&#38;query&#95;hl&#61;18&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Arts GJ&#44; Langemeijer E&#44; Tissingh R&#44; Ma L&#44; Pavliska H&#44; Dokic K&#44; Dooijes R&#44; Mesic E&#44; Clasen R&#44; Michiels F&#44; van der Schueren J&#44; Lambrecht M&#44; Herman S&#44; Brys R&#44; Thys K&#44; Hoffmann M&#44; Tomme P&#44; van Es H</a>&#58; Adenoviral vectors expressing siRNAs for discovery and validation of gene function&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Genome Res</span> 13&#58; 2325-2332&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">61&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;14563560&#38;query&#95;hl&#61;2&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Zhao LJ&#44; Jian H&#44; Zhu H</a>&#58; Specific gene inhibition by adenovirus-mediated expression of small interfering RNA&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Gene</span> 16&#59;316&#58; 137-141&#44; 2003&#46; </p> <p class="elsevierStylePara">62&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12867952&#38;query&#95;hl&#61;7&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Kay MA&#44; Nakai H</a>&#58; Looking into the safety of AAV vectors&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature</span> 424&#58; 251&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">63&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12620795&#38;query&#95;hl&#61;7&#38;itool&#61;pubmed&#95;DocSum" class="elsevierStyleCrossRefs">Thomas CL&#44; Leh V&#44; Lederer C&#44; Maule AJ&#46;</a> Turnip crinkle virus coat protein mediates suppression of RNA silencing in <span class="elsevierStyleItalic">Nicotiana benthamiana</span>&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Virology</span> 306&#58; 33-41&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">64&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;16914898&#38;query&#95;hl&#61;26&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Rodriguez-Barbero A&#44; Obreo J&#44; Alvarez-Munoz P&#44; Pandiella A&#44; Bernabeu C&#44; Lopez-Novoa JM&#46;</a> Endoglin modulation of TGF-beta1-induced collagen synthesis is dependent on ERK1&#47;2 MAPK activation&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Cell </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Physiol</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biochem</span> 18&#58; 135-142&#44; 2006&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">65&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;16840721&#38;query&#95;hl&#61;26&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Jerkic M&#44; Rivas-Elena JV&#44; Santibanez JF&#44; Prieto M&#44; Rodriguez-Barbero A&#44; Perez-Barriocanal F&#44; Pericacho M&#44; Arevalo M&#44; Vary CP&#44; Letarte M&#44; Bernabeu C&#44; Lopez-Novoa JM</a>&#58; Endoglin regulates cyclooxygenase-2 expression and activity&#46; 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Feng B&#44; Chen G&#44; Zhang X&#44; Li M&#44; Sun H&#44; Liu W&#44; Vladau C&#44; Liu R&#44; Jevnikar AM&#44; Garcia B&#44; Zhong R&#44; Min WP</a>&#58; Preventing renal ischemia-reperfusion injury using small interfering RNA by targeting complement 3 gene&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Am J Transplant</span> 6&#58;2099-2108&#44; 2006&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">68&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12052832&#38;query&#95;hl&#61;12&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Abdelrahim M&#44; Samudio I&#44; Smith R&#44; Burghardt R&#44; Safe S</a>&#58; Small inhibitory RNA duplexes for Sp1 mRNA block basal and estrogen-induced gene expression and cell cycle progression in MCF-7 breast cancer cells&#46; <span class="elsevierStyleItalic">J </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Biol</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Chem</span> 277&#58; 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<span class="elsevierStyleItalic">Hepatology</span>&#59; 37&#58; 764-760&#44; 2003&#46;  </p> <p class="elsevierStylePara">73&#46;  Giladi  H&#44; Ketzinel-Gilad M&#44;  Rivkin  L&#44; Felig Y&#44;  Nussbaum  O&#44;  Galun  E&#58; Small interfering RNA inhibits Hepatitis B virus replication in mice&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Molecular Therapy</span> 8&#58; 769-776&#44; 2003&#46;        </p> <p class="elsevierStylePara">74&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12790512&#38;query&#95;hl&#61;9&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Walker MP&#44; Appleby TC&#44; Zhong W&#44; Lau JY&#44; Hong Z</a>&#58; Hepatitis C virus therapies&#58; current treatments&#44; targets and future perspectives&#46;  <span class="elsevierStyleItalic">Antivir</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Chem</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>  <span class="elsevierStyleItalic">Chemother</span> <span class="elsevierStyleItalic"> </span>14&#58; 1-21&#44; 2003&#46;   </p> <p class="elsevierStylePara">75&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;14991934&#38;query&#95;hl&#61;19&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Liang XS&#44; Lian JQ&#44; Zhou YX&#44; Wan MB</a>&#58; Inhibitor RNA blocks the protein translation mediated by hepatitis C virus internal ribosome entry site in vivo&#46; <span class="elsevierStyleItalic">World J Gastroenterol</span> 10&#58;664-667&#44; 2004&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">76&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;16565705&#38;query&#95;hl&#61;16&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Zimmermann TS&#44; Lee AC&#44; Akinc A&#44; Bramlage B&#44; Bumcrot D&#44; Fedoruk MN&#44; Harborth J&#44; Heyes JA&#44; Jeffs LB&#44; John M&#44; Judge AD&#44; Lam K&#44; McClintock K&#44; Nechev LV&#44; Palmer LR&#44; Racie T&#44; Rohl I&#44; Seiffert S&#44; Shanmugam S&#44; Sood V&#44; Soutschek J&#44; Toudjarska I&#44; Wheat AJ&#44; Yaworski E&#44; Zedalis W&#44; Koteliansky V&#44; Manoharan M&#44; Vornlocher HP&#44; MacLachlan I</a>&#58; RNAi-mediated gene silencing in non-human primates&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nature</span> 441&#58;111-1144&#44; 2006&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">77&#46; <a href="http&#58;&#47;&#47;www&#46;ncbi&#46;nlm&#46;nih&#46;gov&#47;entrez&#47;query&#46;fcgi&#63;db&#61;pubmed&#38;cmd&#61;Retrieve&#38;dopt&#61;AbstractPlus&#38;list&#95;uids&#61;12579197&#38;query&#95;hl&#61;23&#38;itool&#61;pubmed&#95;docsum" class="elsevierStyleCrossRefs">Song E&#44; Lee SK&#44; Wang J&#44; Ince N&#44; Ouyang N&#44; Min J&#44; Chen J&#44; Shankar P&#44; Lieberman J</a>&#58; RNA interference targeting Fas protects mice from fulminant hepatitis&#46; <span class="elsevierStyleItalic">Nat Med</span> 9&#58; 347-351&#44; 2003&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">78&#46; Soutschek J&#44; Akinc A&#44; Bramlage B&#44; Charisse K&#44; Constien R&#44; Donoghue M&#44; Elbashir S&#44; Geick A&#44; Hadwiger P&#44; Harborth J&#44; John M&#44; Kesavan V&#44; Lavine G&#44; Pandey RK&#44; Racie T&#44; Rajeev KG&#44; Rohl I&#44; Toudjarska I&#44; Wang G&#44; Wuschko S&#44; Bumcrot D&#44; Koteliansky V&#44; Limmer S&#44; Manoharan M&#44; Vornlocher HP&#58; Therapeutic silencing of an endogenous gene by systemic administration of modified siRNAs&#46;<span class="elsevierStyleItalic">Nature</span> 432&#58; 173-178&#44; 2004&#46;</p> <span class="elsevierStyleBold"><br /></span> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">LEYENDAS DE LAS FIGURAS</span></p> <p class="elsevierStylePara">Figura 1&#46; Portada del art&#237;culo de Napoli y cols&#44; 1990 &#40;referencia 1&#41; &#44; en el que se describe por primera vez el silenciamiento g&#233;nico&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Figura 2&#46; Fenotipos de las flores de los diferentes clones transg&#233;nicos obtenidos y variaciones de la coloraci&#243;n de las flores dentro de una &#250;nica planta &#40;Obtenido de referencia 1&#41;&#46;</p> <p class="elsevierStylePara">Figura 3&#46; Esquema del mecanismo de acci&#243;n del iRNA&#46;</p> <br /> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold">TABLA 1&#46; </span>Principales t&#233;rminos mencionados en el art&#237;culo con sus respectivos significados&#46;<span class="elsevierStyleBold"></span></p>  <table > <tbody > <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">iRNA</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">Interference RNA</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">RNA de interferencia</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">dsRNA</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">Doubled Stranded RNA</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">RNA de doble cadena</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">miRNA</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">microRNA</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">microRNA</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">RISC</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">RNA-induced silencing complex</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">Complejo de silenciamiento inducido por mRNA</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">RdRP</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">RNA-dependent RNA polymerase</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">RNA polimerasa dependiente de RNA</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">siRNA</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">Small Interfering RNA</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">RNA de interferencia corto</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">aRNA</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">Aberrant RNA</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">RNA aberrante</p></td> </tr> <tr > <td width="87" > <p class="elsevierStylePara">shRNA</p></td> <td width="213" > <p class="elsevierStylePara">Small hairpin RNA</p></td> <td width="198" > <p class="elsevierStylePara">Horquilla peque&#241;a de RNA</p></td> </tr> </tbody> </table>  <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p> <p class="elsevierStylePara"><span class="elsevierStyleBold"></span></p>"
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Información del artículo
ISSN: 02116995
Idioma original: Español
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año/Mes Html Pdf Total
2024 Noviembre 30 12 42
2024 Octubre 281 63 344
2024 Septiembre 186 53 239
2024 Agosto 148 67 215
2024 Julio 141 36 177
2024 Junio 193 67 260
2024 Mayo 265 78 343
2024 Abril 261 56 317
2024 Marzo 275 44 319
2024 Febrero 215 60 275
2024 Enero 182 32 214
2023 Diciembre 221 38 259
2023 Noviembre 252 48 300
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2020 Diciembre 150 16 166
2020 Noviembre 159 27 186
2020 Octubre 105 28 133
2020 Septiembre 148 13 161
2020 Agosto 101 22 123
2020 Julio 122 20 142
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