El líquido de diálisis con citrato no induce in vitro estrés oxidativo ni inflamación en comparación con el acetato

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Análisis comparativo (media±DE) de la expresión de ICAM-1 y ROS en células inmunocompetentes de sangre periférica de enfermos con enfermedad renal crónica en tratamiento de hemodiálisis. No se observaron diferencias en la expresión de ICAM-1 entre las diferentes muestras. Con relación a la expresión de ROS, cuando las células se cultivaron con líquidos con acetato se observaron diferencias significativas respecto al control y a las células tratadas con líquidos cont citrato (*p<0,05)." ] ] ] "textoCompleto" => "IntroducciónLas máquinas de hemodiálisis (HD) son capaces de producir un líquido de diálisis (LD) que contiene sales de calcio y magnesio y, al mismo tiempo, bicarbonato. Para mantener la solubilidad de esas sales es necesario añadir un ácido que mantenga un pH concreto, entre 7,1 y 7,6<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0145">1</a>. El que se ha venido añadiendo al LD es el ácido acético, generalmente en concentraciones de 3 o 4mmol/L. El paso del ácido acético a acetil-coenzima-A y su metabolización en el círculo del ácido cítrico produce de forma equimolar bicarbonato. En la HD con bicarbonato y 3-4mmol/L de acetato, hasta un 25% de la alcalinización que se produce proviene del acetato. En la mayoría de los pacientes la acetatemia se incrementa durante la sesión de HD, dado que la transferencia de acetato del LD a la sangre es superior a la capacidad de su metabolización en el organismo. Este aumento de la acetatemia es mayor con técnicas de alta eficacia, como la hemodiafiltración en línea (HDF-OL)<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0150">2</a>, y también es mayor en las personas con menor capacidad de metabolizar acetato, por ejemplo, personas con menor masa muscular, edad avanzada o insuficiencia hepática<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0155">3</a>.El incremento de la acetatemia durante la sesión de HD se ha asociado a una serie de alteraciones: aumento del estrés oxidativo, de las citocinas proinflamatorias y de la síntesis de óxido nítrico<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0160">4-8</a>. Hasta un 50% de los pacientes en HD presentan una situación de inflamación crónica de bajo grado. La hiperacetatemia sería un coadyuvante de esta situación, junto a la exposición a sustancias pirogénicas o a materiales bioincompatibles. La hiperacetatemia se ha asociado a la intolerancia hemodinámica a las HD<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185">9</a>.Por lo anterior, se ha intentado sustituir el acetato del LD por otro ácido, o eliminarlo sin más. Esto último se logró mediante la técnica de hemodiafiltración denominada, «acetate free biofiltration» (AFB), en la que el LD no contiene acetato ni bicarbonato, y este se infunde de manera intravenosa. La retirada del acetato en la AFB implicaba que desapareciera la activación de los polimorfonucleares y monocitos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0190">10</a> o el aumento de la síntesis de óxido nítrico<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0170">6</a>. Por otro lado, el acetato se ha logrado sustituir en el LD por ácido clorhídrico o cítrico<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0180">8,11,12</a>.El ácido cítrico puede jugar un papel alternativo al acetato como estabilizante del LD. El citrato, en comparación con el acetato, tiene un patrón diferente en cuanto a la activación leucocitaria y del complemento<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0205">13</a>. El citrato como anticoagulante regional (RCA) en HD, respecto a la heparina, ha demostrado efectos favorables sobre la inflamación<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0210">14-16</a>, bien es verdad que las concentraciones de citrato en la RCA son sustancialmente mayores que las de los LD con citrato. En una HD con 1mmol/L de citrato en el LD, la sangre que retorna al paciente tiene una concentración de 0,58mmol/L, mientras que la normal es 0,1mmol/L. Al cabo de 4 h de HD, la concentración sistémica de citrato estaría en 0,25-0,3mmol/L<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0225">17</a>. Con 0,8mmol/L de citrato en el LD, la citratemia al final de la HD estaría entre 0,2 y 0,25mmol/L, en HDF-OL llegaría a 0,3mmol/L<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0225">17</a>. En estas concentraciones, y respecto al acetato, se reduciría la activación del complemento y de los granulocitos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0205">13</a>. La HDF-OL con citrato lograría niveles más bajos de PCR y β2-microglobulina respecto a la de acetato<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0225">17</a>.En los trabajos referidos, es difícil separar los efectos beneficiosos sobre la inflamación de la retirada del acetato del LD de los de la inclusión del citrato.En la actualidad disponemos de 2tipos de LD con citrato. El primero contiene 1mmol/L de citrato y no contiene acetato; el segundo lleva 0,8mmol/L de citrato y 0,3mmol/L de acetato. El LD estándar de HD que utilizamos contiene 3 o 4mmol/L de acetato.En este trabajo hemos querido valorar in vitro el estrés oxidativo, las moléculas de adhesión y las micropartículas totales en las células de pacientes urémicos expuestas a LD solo con citrato, con citrato+acetato y solo con acetato, en concentraciones de 3 o 4mmol/L. El objetivo de este estudio es comparar el acetato con el citrato en el LD respecto a su efecto inflamatorio en las células inmunocompetentes de la sangre.Material y métodosEl efecto del acetato y del citrato fue investigado en sangre completa de pacientes urémicos y controles sanos in vitro. La sangre se extrajo de pacientes que no habían recibido medicación antiinflamatoria en los días anteriores.Tipos de muestras de sangreSe obtuvieron 2 pool de sangre conservada en el biobanco de la RED de Investigación Renal (REDinREN, Madrid). El primer pool corresponde a sangre de 12 pacientes con enfermedad renal crónica (ERC) en HD: en estos se han hecho 3 experimentos y los resultados de cada experimento son la media de 3 pocillos. El otro pool procede de 4controles sanos, con características semejantes de edad (media de 60 años), y género (50% hombres). Dos de los pacientes de HD eran diabéticos. Las muestras de sangre se extrajeron pre-HD. Con estas muestras se han hecho 3 experimentos y los datos son la media de 3 pocillos.Líquidos de hemodiálisisSe fabricó líquido de HD (LD) de 4tipos:- El LD 1, con 1mmol/L de citrato y libre de acetato: SelectBag Citrate® producido en máquinas de HD AK200-ultra-S.- El LD 2, con 0,8mmol/L de citrato y 0,3mmol/L de acetato: Citrasate® 323C producido en Sistemas Terapéuticos 5008 FMC®.- El LD 3, con 3mmol/L de acetato sin citrato: SoftPac® producido en máquinas de HD AK200-ultra-S.- El LD 4, con 4mmol/L de acetato sin citrato: producido en Sistemas Terapéuticos 5008 FMC®.La composición de los LD utilizados se muestra en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabla 1</a>. Se ordenan de menor a mayor concentración de acetato en el LD. El LD cumple las características de LD ultrapuro<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0230">18</a>. Las muestras se tomaron del hansen a la entrada del dializador, una vez que la máquina se había estabilizado (conductividades y temperatura). Las muestras se manejaron de forma estanca.<elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia>Cultivo de monocitos humanos (THP-1)Las monocitos humanos (células THP-1; línea celular THP-1, Sigma, n.° de catálogo 88081201) fueron cultivados en el medio RPMI 1640 con el 10% de penicilina-estreptomicina, ambos suministrados por Lonza (Basilea, Suiza) y al 10% de suero fetal bovino FBS de Sigma (St. Louis, Estados Unidos).Células mononucleares de sangre periféricaLas células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se obtuvieron a partir de 10ml de sangre recogida en tubos de EDTA mediante gradiente de densidad utilizando Lymphocytes Isolation Solution (Rafer, Zaragoza, España).Determinación de moléculas de adhesiónSe determinaron moléculas de adhesión (intercellular adhesion molecule 1, CD54/ICAM-1) tanto en células THP-1 como en PBMC siguiendo el mismo protocolo.Las células se sembraron a una densidad de 106 células/ml en placas de 6 pocillos (Nunclon™ Delta, NUNC® Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, Estados Unidos). Se incubaron durante la noche con los distintos LD y utilizando un buffer salino tamponado en fosfato (PBS, Sigma, Sant Louis, Missouri, Estados Unidos) como control. La determinación de moléculas de adhesión se realizó mediante técnicas de inmunofluorescencia utilizando el anticuerpo monoclonal MEM-111 conjugado con FITC frente a la molécula CD54, adquirido en Thermo Fisher Scientific (Waltham, Massachusetts, Estados Unidos). Se utilizó el citómetro de flujo FACSCalibur de Becton Dickinson (San José, California, Estados Unidos) y el software Cyflogic para analizar el canal medio de fluorescencia.Cuantificación de los niveles de especies reactivas de oxígenoLa medida de la actividad de las especies reactivas de oxígeno (ROS) se realizó mediante el método descrito por Wang y Josep (Wang y Joseph, 1999) que se basa en la fluorescencia emitida por la 2′,7′diclorodihidrofluoresceína al oxidarse en 2′,7¿diclorofluoresceína.Las PBMC fueron sembradas en placas de 6 pocillos a una densidad del 106 células/ml. Las células fueron tratadas con los correspondientes líquidos durante la noche. Transcurrido este tiempo, las células se lavaron con solución salina tamponada con fosfato PBS (Sigma, Sant Louis, Missouri, Estados Unidos) y se incubaron a una concentración de 5μM de H2DCFDA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, Estados Unidos) en medio fresco durante 30 min. El análisis se realizó por citometría de flujo FACSCalibur (Becton Dickinson) y se analizó el canal medio de florescencia con el software Cyflogic.Cuantificación de microvesículasLas microvesículas se cuantificaron en el sobrenadante recogido del cultivo de las PBMC tratadas con los distintos líquidos durante la noche. Una alícuota fue marcada con annexin V conjugada con FITC suministrada por Becton Dickinson. El análisis se realizó mediante citometría de flujo FACSCalibur (Becton Dickinson). Primero se seleccionó la población de microvesículas en función del tamaño (FSC/forward scatter) y complejidad (SSC/side scatter) utilizando el kit Flow Cytometry Sub-Micron Size Reference Kit, Green Fluorescent (Life Technologies, Paisley, Estados Unidos) como referencia y, a continuación, se seleccionaron las microvesículas anexina V positivas. Para poder cuantificar la concentración de microvesículas se utilizó un número conocido de microesferas de látex flow count (Beckman Coulter, Brea, California, Estados Unidos).Unidades de los resultados y estadísticaAl determinar la expresión de moléculas de adhesión, o niveles de ROS en las células PBMC, se observaron niveles basales muy variables, por lo que decidimos expresar los resultados atribuyendo un valor arbitrario de uno a la muestra control, y determinando el incremento o decremento respecto a este valor cuando las células eran cultivadas en presencia de los diferentes líquidos objeto del estudio. Las unidades son tantos por uno o veces el control.Los resultados se expresan como la media±DE de los experimentos; cada uno realizado por triplicado. Se empleó el análisis de varianza de un paso para comparar los resultados de los 5 grupos, en cada una de las pruebas; previamente, se realizó el test de Levene. Si era necesario, se recurrió a una prueba no paramétrica: Kruskal-Wallis. Para la comparación entre 2de los grupos entre sí se utilizó la t de Student pareada o el test de Mann-Whitney, según correspondía. Se consideró como significativa una p < 0,05. El análisis estadístico se realizó con el paquete SPSS 15.0 Inc. (Chicago, Illinois, Estados Unidos).ResultadosCaracterización de la activación de la línea monocitaria THP-1 inducida por los diferentes líquidos de diálisisLos estudios realizados sobre la expresión de la molécula de adhesión (ICAM-1) en la línea celular monocitaria THP-1 mostraron que los LD que contenían acetato (L3 y L4) indujeron un incremento en la densidad de expresión de ICAM-1 en las células THP-1 (<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0005">fig. 1</a>). El canal medio de fluorescencia para la molécula mostró un incremento de 2,61±0,79 y 2,97±0,81 veces, respectivamente, para L3 y L4 respecto a la densidad media observada en las células control (1±0,11). Por el contrario, los líquidos que contenían citrato (L1 y L2) no modificaron la expresión de ICAM-1 en células THP-1 (canal medio de fluorescencia de 0,73±0,27 y 0,86±0,23, respectivamente para L1 y L2).<elsevierMultimedia ident="fig0005"></elsevierMultimedia>Activación de células inmunocompetentes de sujetos sanosComo puede observarse en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0010">figura 2</a>, en la expresión de ICAM-1, no se observaron diferencias significativas respecto al control cuando las células fueron cultivadas con los diferentes líquidos. Sin embargo, al comparar la expresión en células cultivadas con líquidos que contenían citrato (L1 y L2) y la de los líquidos que contenían solo acetato (L3 y L4), sí observamos un incremento en la expresión de ICAM-1 inducida por los líquidos con acetato.<elsevierMultimedia ident="fig0010"></elsevierMultimedia>El estudio de la expresión de ROS como indicador de estrés oxidativo reveló que los líquidos con acetato indujeron mayor actividad que los líquidos que contenían citrato. Como se puede ver en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0010">figura 2</a>, los líquidos L3 y L4 indujeron una actividad significativamente mayor de ROS en PBMC vs. control (p < 0,05), y en las células tratadas con L1 y L2 (p<0,05).Al igual que ocurría en las determinaciones de ROS, los líquidos L3 y L4 indujeron un incremento en la producción de microvesículas (Δ=2,73±0,62 y 2,84±0,59, respectivamente, respecto al control, p<0,01) (<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0015">fig. 3</a>). Sin embargo, no se observaron diferencias en las células cultivadas con los líquidos L1 y L2 (Δ=0,94±0,233 y 1,19±0,31, respectivamente, respecto al control).<elsevierMultimedia ident="fig0015"></elsevierMultimedia>Activación de células inmunocompetentes de sujetos con insuficiencia renal crónicaEncontramos un paralelismo entre lo observado en las células de sujetos sanos y lo observado en las células de enfermos en lo referente a expresión de ROS, o producción de microvesículas. Como se recoge en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0020">figura 4</a>, al igual que ocurría en las células de sujetos sanos, los líquidos que contenían acetato indujeron mayor actividad ROS (p < 0,005, vs. control y células tratadas con L1 y L2); o en la producción de microvesículas (<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0015">fig. 3</a>). Mientras que el incremento en el número de microvesículas con L1 y L2 fue de 0,16±0,61 y 0,21±0,48, respectivamente, respecto al control (ns), con L3 y L4 se observó un incremento de 1,73±0,46 y 1,82±0,29 (p<0,05).<elsevierMultimedia ident="fig0020"></elsevierMultimedia>DiscusiónEn este estudio in vitro el acetato, en concentraciones de 3 y 4mmol/L en el LD, induce en las células inmunocompetentes de la sangre un aumento de ICAM-1, ROS y microvesículas circulantes. El citrato no induce esa respuesta inflamatoria.Entre un 50 y un 60% de los pacientes en HD presentan un estado de inflamación crónica de bajo grado, que se ha relacionado con la desnutrición, amiloidosis, ateroesclerosis, susceptibilidad a las infecciones y con la elevada morbimortalidad de estos pacientes<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0235">19,20</a>. Esta situación inflamatoria crónica es multifactorial: en parte se debe a la uremia y en parte a factores propios de la técnica de diálisis<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0245">21-23</a>. Entre los factores proinflamatorios propios de la HD está la presencia de acetato en el LD en una concentración de 20 a 40 veces superiror a la del plasma. La transferencia de acetato al paciente durante la HD se ha asociado a aumento del estrés oxidativo, de las citocinas proinflamatorias y de la síntesis de óxido nítrico<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0160">4-8</a>. Durante la sesión de HD hay otros factores proinflamatorios, como la membrana del dializador, las líneas, endotoxinas y otras sustancias pirogénicas, que hacen difícil valorar el papel de uno de ellos individualmente, como es el caso del acetato. Por ello, se ha recurrido a un experimento in vitro para dilucidar ese efecto proinflamatorio.La inducción de inflamación del acetato del LD no depende solo del tipo de molécula, sino de su concentración. El acetato es una molécula fisiológica: sería su concentración entre 30 y 40 veces superior a la normal lo que provocaría la respuesta inflamatoria. Por el contrario, el citrato, aunque también está en concentraciones muy elevadas, no provoca ese efecto. Las concentraciones de una y otra molécula no son arbitrarias ni fácilmente modificables. Son las necesarias para estabilizar el LD y para contribuir al balance ácido-base adecuado durante la HD. En este estudio hemos utilizado las concentraciones habituales en el LD.Como primera aproximación experimental para determinar una posible actividad diferencial de los LD sobre células inmunocompetentes, determinamos la expresión de ICAM-1 en la línea celular monocitaria THP-1. Esta línea ha sido utilizada habitualmente como modelo en estudios de daño vascular inducido asociado a la actividad inflamatoria y, más concretamente, los cambios en la expresión de ICAM-1 en estas células se han considerado un reflejo de las modificaciones que sufren las células de estirpe monocitaria para favorecer su interacción con el endotelio vascular<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0260">24</a>. Los LD con acetato incrementaron la expresión de ICAM-1 respecto a los controles, mientras que los LD con citrato no lo hicieron.Dado que los LD que contienen acetato habían inducido activación en células THP-1, quisimos comprobar si este efecto era debido a alguna característica específica que mostrasen las células transformadas, por lo que decidimos cultivar PBMC de sujetos sin enfermedad previa conocida con los diferentes LD, incluyendo en este estudio otros biomarcadores asociados a activación celular que pudiesen ser de interés clínico como elementos de ayuda al diagnóstico para determinar la activación celular inducida por LD. En sangre de sujetos sanos no encontramos diferencias en cuanto a la expresión de ICAM-1 con los LD con acetato respecto al control, pero sí respecto a los LD con citrato. En el estudio de ROS se observó que los LD con acetato indujeron mayor actividad que el control y que los LD que contenían citrato. Junto a la determinación de marcadores asociados a activación celular, decidimos incluir en este estudio la determinación de microvesículas totales producidas por los PBMC, dada la relevancia señalada en los últimos años para estas estructuras en la etiopatogenia de diferentes enfermedades, incluidas las enfermedades cardiovasculares desarrolladas en un entorno de respuesta inflamatoria alterada<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0265">25</a>. Al igual que ocurría en las determinaciones de ROS, los LD con acetato indujeron un incremento de la producción de microvesículas.El proceso de inflamación crónica de los pacientes con ERC se suele asociar a la presencia de células inmunocompetentes activadas en sangre periférica. En este estudio, hemos confirmado este hecho y, comparadas con las células de los sujetos control, en las de pacientes con ERC observamos mayor densidad de expresión de ICAM-1 o de niveles basales de ROS (datos no aportados).Cuando comparamos la expresión de los diferentes marcadores de activación celular, a diferencia de lo observado en células de sujetos control, la expresión de ICAM-1 no se modificó con ninguno de los LD. Aunque no se ha podido determinar de forma precisa esta diferencia, una posible explicación viene asociada a la observación descrita anteriormente: al estar las células activadas, la expresión de esta molécula es tan alta que no se puede producir un aumento de su densidad de expresión ante un nuevo estímulo.Se ha descrito un efecto inhibitorio directo del citrato sobre la activación de los granulocitos, contrarrestando la adherencia inducida por el leucotrieno-B4 e interfiriendo con su activación<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0270">26,27</a>. También la activación del complemento estaría reducida, incluso en concentraciones de 0,25mmol/L de citrato<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0205">13</a>. Estos efectos antiinflamatorios del citrato vendrían condicionados por la concentración de calcio, por lo que podrían depender de la concentración de calcio en el LD. Alguno de nuestros resultados avalan este papel beneficioso del citrato, que se añade al de la eliminación del acetato, aunque este último sería el fundamental.El estudio tiene limitaciones como el pequeño número de controles sanos y la limitada información de la situación de las células de los pacientes en HD. Al comparar el efecto de los 5 grupos en las mismas células, disminuye el efecto negativo de esa limitación. La diferente composición de los LD respecto a algunos electrólitos es muy pequeña, pero no se puede excluir que tenga algún efecto.Podemos concluir que el acetato en el LD, en las concentraciones que se utilizan habitualmente en la práctica clínica, aumenta el estrés oxidativo y las microvesículas totales, y puede actuar como coadyuvante de los otros estímulos proinflamatorios a los que están sometidos los pacientes urémicos en HD. Los LD con citrato no producen esta activación, por lo que podrían ser una alternativa en la clínica. El objetivo debería ser eliminar al máximo todos los elementos de la HD bioincompatibles, como lo es el acetato en estas concentraciones. Esto tendría especial interés en los pacientes mayores de 70 años en HD, generalmente metabolizadores más lentos de acetato. En estos, la eliminación del acetato en el LD podría contribuir a una mejor supervivencia independientemente de sus comorbilidades<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0280">28</a>.Conflicto de interesesLos autores declaran no tener ningún conflicto de intereses." 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El ácido cítrico puede jugar un papel alternativo al acetato como estabilizante del líquido de diálisis (LD). El citrato en comparación con el acetato tiene un patrón diferente en cuanto a la activación leucocitaria y del complemento. El objetivo de este estudio es comparar el acetato con el citrato en el LD respecto a su efecto inflamatorio en las células inmunocompetentes de la sangre. Material y métodosEl efecto del acetato o citrato fue investigado en sangre completa de pacientes urémicos y controles sanos in vitro, enfrentada a 4tipos de LD: el LD 1, con 1mmol/L de citrato y libre de acetato; LD 2, con 0,8mmol/L de citrato y 0,3mmol/L de acetato; LD 3, con 3mmol/L de acetato sin citrato y LD 4, con 4mmol/L de acetato sin citrato. Los tipos de células utilizados fueron: cultivo de monocitos humanos (THP-1); células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de controles sanos y pacientes urémicos en HD. Se determinó ICAM-1, la cuantificación de los niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) y la cuantificación de microvesículas totales. ResultadosLos LD con acetato (L3 y L4) indujeron un incremento en la densidad de expresión de ICAM-1 en las células THP-1, no así los de citrato; con células inmunocompetentes de sujetos sanos los LD con acetato (L3 y L4) respecto a los con citrato (L1 y L2) observamos un incremento en la expresión de ICAM-1; con células de pacientes en hemodiálisis no existían diferencias significativas entre los diferentes LD. Tanto en las células de sujetos sanos como en las de los dializados, se incrementaron significativamente la expresión de especies reactivas de oxígeno y las microvesículas con los LD con acetato y no con citrato. ConclusionesEl acetato en el LD, en las concentraciones que se utilizan habitualmente en la práctica clínica, aumenta el estrés oxidativo y las microvesículas totales, y puede actuar como coadyuvante de los otros estímulos proinflamatorios a los que están sometidos los pacientes urémicos en hemodiálisis. Los LD con citrato no producen esta activación, por lo que podrían ser una alternativa en la clínica." "secciones" => array:4 [ 0 => array:1 [ "identificador" => "abst0005" ] 1 => array:2 [ "identificador" => "abst0010" "titulo" => "Material y métodos" ] 2 => array:2 [ "identificador" => "abst0015" "titulo" => "Resultados" ] 3 => array:2 [ "identificador" => "abst0020" "titulo" => "Conclusiones" ] ] ] "en" => array:3 [ "titulo" => "Abstract" "resumen" => "Increased acetataemia during haemodialysis sessions has been associated with a number of abnormalities, including increased oxidative stress, pro-inflammatory cytokines and nitric oxide synthesis. However, citric acid may play an alternative role to acetate as a dialysate stabiliser given that the effect of citrate on complement and leukocyte activation is different to that of acetate. The purpose of this study was to compare the inflammatory effect in immunocompetent blood cells of acetate dialysate and citrate dialysate. Material and methodsThe effect of acetate and/or citrate was investigated in the whole blood of uraemic patients and in healthy in vitro samples. Four types of dialysate were tested: dialysate 1, acetate-free with 1mmol/L of citrate; dialysate 2, with 0.8mmol/L of citrate and 0.3mmol/L of acetate; dialysate 3, citrate-free with 3mmol/L of acetate; and dialysate 4, citrate-free with 4mmol/L of acetate. The cell types used were: human monocyte culture (THP-1); and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from healthy subjects and uraemic patients on haemodialysis. ICAM-1 was determined and levels of reactive oxygen species and total microvesicles were quantified. ResultsUnlike the citrate dialysates, the dialysates with acetate (dialysate 3 and dialysate 4) induced increased ICAM-1 expression density in THP-1 cells; an increase in ICAM-1 expression was observed in the immunocompetent cells of healthy subjects with acetate dialysate (dialysate 3 and dialysate 4) but not with citrate dialysate (dialysate 1 and dialysate 2). No significant ICAM-1 differences were found between the different dialysates in the cells of haemodialysed patients. Reactive oxygen species expression and the number of microvesicles increased significantly with acetate dialysate but not with citrate dialysate in the cells of both healthy subjects and haemodialysed patients. ConclusionsAt the concentrations in which it is generally used in clinical practice, acetate-based dialysate increases oxidative stress and the total number of microvesicles and may induce other pro-inflammatory stimuli typical of uraemic patients on haemodialysis. Citrate dialysates do not induce this activation, which could make them a suitable alternative in clinical practice." 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A) Histogramas representativos de la distribución de microvesículas producidas por células de sujetos sanos con líquidos con citrato (imágenes superiores), y con líquidos con acetato (figuras inferiores). B) Cuantificación del incremento de microvesículas (media±DE) en células inmunocompetentes de sangre periférica de sujetos control en cultivo con líquidos con acetato, que se incrementaron de manera significativa respecto al control y a las células tratadas con líquidos con citrato (*p<0,01). C) Cuantificación del incremento de las microvesículas producidas por célula inmunocompetentes de enfermos con enfermedad renal crónica en tratamiento de hemodiálisis en respuesta a los diferentes líquidos de hemodiálisis Los líquidos con acetato produjeron un incremento significativo de microvesículas en comparación con control o con líquidos con citrato (p<0,05)." ] ] 3 => array:7 [ "identificador" => "fig0020" "etiqueta" => "Figura 4" "tipo" => "MULTIMEDIAFIGURA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "figura" => array:1 [ 0 => array:4 [ "imagen" => "gr4.jpeg" "Alto" => 1397 "Ancho" => 1647 "Tamanyo" => 71506 ] ] "descripcion" => array:1 [ "es" => "ICAM-1 y ROS en células de pacientes en hemodiálisis. Análisis comparativo (media±DE) de la expresión de ICAM-1 y ROS en células inmunocompetentes de sangre periférica de enfermos con enfermedad renal crónica en tratamiento de hemodiálisis. No se observaron diferencias en la expresión de ICAM-1 entre las diferentes muestras. Con relación a la expresión de ROS, cuando las células se cultivaron con líquidos con acetato se observaron diferencias significativas respecto al control y a las células tratadas con líquidos cont citrato (*p<0,05)." ] ] 4 => array:8 [ "identificador" => "tbl0005" "etiqueta" => "Tabla 1" "tipo" => "MULTIMEDIATABLA" "mostrarFloat" => true "mostrarDisplay" => false "detalles" => array:1 [ 0 => array:3 [ "identificador" => "at1" "detalle" => "Tabla " "rol" => "short" ] ] "tabla" => array:1 [ "tablatextoimagen" => array:1 [ 0 => array:2 [ "tabla" => array:1 [ 0 => """ <table border="0" frame="\n \t\t\t\t\tvoid\n \t\t\t\t" class=""><thead title="thead"><tr title="table-row"><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Fórmula \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Referencia \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Na \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Ca \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Mg \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">K \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Cl \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Citrato \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Acetato \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Bicarbonato \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Glucosa \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Osmolaridad \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</th></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td" title="table-entry " align="" valign="top"> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="" valign="top"> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">mM/L \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">mM/L \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">mM/L \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="" valign="top"> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">mM/L \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">mM/L \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">mM/L \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">mM/L \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">mM/L \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">mOsm/L \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">LD1 Citrato Gambro® \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">CX 265 G \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">140 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">1,65 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">0,5 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">2 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">109,3 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">1 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">0 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">34 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">8,33 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="" valign="top"> \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">LD 2 Citrasate® \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">303-C (A+B) \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">139,3 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">1,665 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">0,475 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">1,9 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">104,37 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">0,8 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">0,3 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">35 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">8,33 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry " align="left" valign="top">287,22 \t\t\t\t\t\t\n \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; 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Original

El líquido de diálisis con citrato no induce in vitro estrés oxidativo ni inflamación en comparación con el acetato

Citrate dialysate does not induce oxidative stress or inflammation in vitro as compared to acetate dialysate

Rafael Pérez-Garcíaa,

Autor para correspondencia

rperezga@salud.madrid.org

Autor para correspondencia.

, Rafael Ramírez Chamondb, Patricia de Sequera Ortiza, Marta Albalatea, Marta Puerta Carreteroa, Mayra Ortegaa, M. Caridad Ruiz Caroa, Roberto Alcazar Arroyoa

a Servicio de Nefrología, Hospital Universitario Infanta Leonor, Madrid, España

b Departamento de Biología de Sistemas, Facultad de Medicina y Ciencias de la Salud Universidad de Alcalá, Alcalá de Henares (Madrid), España

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En la HD con bicarbonato y 3-4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de acetato&#44; hasta un 25&#37; de la alcalinizaci&#243;n que se produce proviene del acetato&#46; En la mayor&#237;a de los pacientes la acetatemia se incrementa durante la sesi&#243;n de HD&#44; dado que la transferencia de acetato del LD a la sangre es superior a la capacidad de su metabolizaci&#243;n en el organismo&#46; Este aumento de la acetatemia es mayor con t&#233;cnicas de alta eficacia&#44; como la hemodiafiltraci&#243;n en l&#237;nea &#40;HDF-OL&#41;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0150"><span class="elsevierStyleSup">2</span></a>&#44; y tambi&#233;n es mayor en las personas con menor capacidad de metabolizar acetato&#44; por ejemplo&#44; personas con menor masa muscular&#44; edad avanzada o insuficiencia hep&#225;tica<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0155"><span class="elsevierStyleSup">3</span></a>&#46;</p><p id="par0010" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El incremento de la acetatemia durante la sesi&#243;n de HD se ha asociado a una serie de alteraciones&#58; aumento del estr&#233;s oxidativo&#44; de las citocinas proinflamatorias y de la s&#237;ntesis de &#243;xido n&#237;trico<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0160"><span class="elsevierStyleSup">4-8</span></a>&#46; Hasta un 50&#37; de los pacientes en HD presentan una situaci&#243;n de inflamaci&#243;n cr&#243;nica de bajo grado&#46; La hiperacetatemia ser&#237;a un coadyuvante de esta situaci&#243;n&#44; junto a la exposici&#243;n a sustancias pirog&#233;nicas o a materiales bioincompatibles&#46; La hiperacetatemia se ha asociado a la intolerancia hemodin&#225;mica a las HD<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0185"><span class="elsevierStyleSup">9</span></a>&#46;</p><p id="par0015" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Por lo anterior&#44; se ha intentado sustituir el acetato del LD por otro &#225;cido&#44; o eliminarlo sin m&#225;s&#46; Esto &#250;ltimo se logr&#243; mediante la t&#233;cnica de hemodiafiltraci&#243;n denominada&#44; &#171;acetate free biofiltration&#187; &#40;AFB&#41;&#44; en la que el LD no contiene acetato ni bicarbonato&#44; y este se infunde de manera intravenosa&#46; La retirada del acetato en la AFB implicaba que desapareciera la activaci&#243;n de los polimorfonucleares y monocitos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0190"><span class="elsevierStyleSup">10</span></a> o el aumento de la s&#237;ntesis de &#243;xido n&#237;trico<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0170"><span class="elsevierStyleSup">6</span></a>&#46; Por otro lado&#44; el acetato se ha logrado sustituir en el LD por &#225;cido clorh&#237;drico o c&#237;trico<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0180"><span class="elsevierStyleSup">8&#44;11&#44;12</span></a>&#46;</p><p id="par0020" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El &#225;cido c&#237;trico puede jugar un papel alternativo al acetato como estabilizante del LD&#46; El citrato&#44; en comparaci&#243;n con el acetato&#44; tiene un patr&#243;n diferente en cuanto a la activaci&#243;n leucocitaria y del complemento<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0205"><span class="elsevierStyleSup">13</span></a>&#46; El citrato como anticoagulante regional &#40;RCA&#41; en HD&#44; respecto a la heparina&#44; ha demostrado efectos favorables sobre la inflamaci&#243;n<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0210"><span class="elsevierStyleSup">14-16</span></a>&#44; bien es verdad que las concentraciones de citrato en la RCA son sustancialmente mayores que las de los LD con citrato&#46; En una HD con 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de citrato en el LD&#44; la sangre que retorna al paciente tiene una concentraci&#243;n de 0&#44;58<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L&#44; mientras que la normal es 0&#44;1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L&#46; Al cabo de 4&#160;h de HD&#44; la concentraci&#243;n sist&#233;mica de citrato estar&#237;a en 0&#44;25-0&#44;3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0225"><span class="elsevierStyleSup">17</span></a>&#46; Con 0&#44;8<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de citrato en el LD&#44; la citratemia al final de la HD estar&#237;a entre 0&#44;2 y 0&#44;25<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L&#44; en HDF-OL llegar&#237;a a 0&#44;3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0225"><span class="elsevierStyleSup">17</span></a>&#46; En estas concentraciones&#44; y respecto al acetato&#44; se reducir&#237;a la activaci&#243;n del complemento y de los granulocitos<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0205"><span class="elsevierStyleSup">13</span></a>&#46; La HDF-OL con citrato lograr&#237;a niveles m&#225;s bajos de PCR y &#946;2-microglobulina respecto a la de acetato<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0225"><span class="elsevierStyleSup">17</span></a>&#46;</p><p id="par0025" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En los trabajos referidos&#44; es dif&#237;cil separar los efectos beneficiosos sobre la inflamaci&#243;n de la retirada del acetato del LD de los de la inclusi&#243;n del citrato&#46;</p><p id="par0030" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En la actualidad disponemos de 2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>tipos de LD con citrato&#46; El primero contiene 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de citrato y no contiene acetato&#59; el segundo lleva 0&#44;8<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de citrato y 0&#44;3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de acetato&#46; El LD est&#225;ndar de HD que utilizamos contiene 3 o 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de acetato&#46;</p><p id="par0035" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En este trabajo hemos querido valorar <span class="elsevierStyleItalic">in vitro</span> el estr&#233;s oxidativo&#44; las mol&#233;culas de adhesi&#243;n y las micropart&#237;culas totales en las c&#233;lulas de pacientes ur&#233;micos expuestas a LD solo con citrato&#44; con citrato<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>acetato y solo con acetato&#44; en concentraciones de 3 o 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L&#46; El objetivo de este estudio es comparar el acetato con el citrato en el LD respecto a su efecto inflamatorio en las c&#233;lulas inmunocompetentes de la sangre&#46;</p></span><span id="sec0010" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0060">Material y m&#233;todos</span><p id="par0040" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El efecto del acetato y del citrato fue investigado en sangre completa de pacientes ur&#233;micos y controles sanos <span class="elsevierStyleItalic">in vitro</span>&#46; La sangre se extrajo de pacientes que no hab&#237;an recibido medicaci&#243;n antiinflamatoria en los d&#237;as anteriores&#46;</p><span id="sec0015" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0065">Tipos de muestras de sangre</span><p id="par0045" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se obtuvieron 2 <span class="elsevierStyleItalic">pool</span> de sangre conservada en el biobanco de la RED de Investigaci&#243;n Renal &#40;REDinREN&#44; Madrid&#41;&#46; El primer <span class="elsevierStyleItalic">pool</span> corresponde a sangre de 12 pacientes con enfermedad renal cr&#243;nica &#40;ERC&#41; en HD&#58; en estos se han hecho 3 experimentos y los resultados de cada experimento son la media de 3 pocillos&#46; El otro <span class="elsevierStyleItalic">pool</span> procede de 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>controles sanos&#44; con caracter&#237;sticas semejantes de edad &#40;media de 60 a&#241;os&#41;&#44; y g&#233;nero &#40;50&#37; hombres&#41;&#46; Dos de los pacientes de HD eran diab&#233;ticos&#46; Las muestras de sangre se extrajeron pre-HD&#46; Con estas muestras se han hecho 3 experimentos y los datos son la media de 3 pocillos&#46;</p></span><span id="sec0020" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0070">L&#237;quidos de hemodi&#225;lisis</span><p id="par0050" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se fabric&#243; l&#237;quido de HD &#40;LD&#41; de 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>tipos&#58;</p><p id="par0055" class="elsevierStylePara elsevierViewall">- El LD 1&#44; con 1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de citrato y libre de acetato&#58; SelectBag Citrate&#174; producido en m&#225;quinas de HD AK200-ultra-S&#46;</p><p id="par0060" class="elsevierStylePara elsevierViewall">- El LD 2&#44; con 0&#44;8<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de citrato y 0&#44;3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de acetato&#58; Citrasate&#174; 323<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>C producido en Sistemas Terap&#233;uticos 5008 FMC&#174;&#46;</p><p id="par0065" class="elsevierStylePara elsevierViewall">- El LD 3&#44; con 3<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de acetato sin citrato&#58; SoftPac&#174; producido en m&#225;quinas de HD AK200-ultra-S&#46;</p><p id="par0070" class="elsevierStylePara elsevierViewall">- El LD 4&#44; con 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de acetato sin citrato&#58; producido en Sistemas Terap&#233;uticos 5008 FMC&#174;&#46;</p><p id="par0075" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La composici&#243;n de los LD utilizados se muestra en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#tbl0005">tabla 1</a>&#46; Se ordenan de menor a mayor concentraci&#243;n de acetato en el LD&#46; El LD cumple las caracter&#237;sticas de LD ultrapuro<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0230"><span class="elsevierStyleSup">18</span></a>&#46; Las muestras se tomaron del hansen a la entrada del dializador&#44; una vez que la m&#225;quina se hab&#237;a estabilizado &#40;conductividades y temperatura&#41;&#46; Las muestras se manejaron de forma estanca&#46;</p><elsevierMultimedia ident="tbl0005"></elsevierMultimedia></span><span id="sec0025" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0075">Cultivo de monocitos humanos &#40;THP-1&#41;</span><p id="par0080" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las monocitos humanos &#40;c&#233;lulas THP-1&#59; l&#237;nea celular THP-1&#44; Sigma&#44; n&#46;&#176; de cat&#225;logo 88081201&#41; fueron cultivados en el medio RPMI 1640 con el 10&#37; de penicilina-estreptomicina&#44; ambos suministrados por Lonza &#40;Basilea&#44; Suiza&#41; y al 10&#37; de suero fetal bovino FBS de Sigma &#40;St&#46; Louis&#44; Estados Unidos&#41;&#46;</p></span><span id="sec0030" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0080">C&#233;lulas mononucleares de sangre perif&#233;rica</span><p id="par0085" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las c&#233;lulas mononucleares de sangre perif&#233;rica &#40;PBMC&#41; se obtuvieron a partir de 10<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>ml de sangre recogida en tubos de EDTA mediante gradiente de densidad utilizando Lymphocytes Isolation Solution &#40;Rafer&#44; Zaragoza&#44; Espa&#241;a&#41;&#46;</p></span><span id="sec0035" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0085">Determinaci&#243;n de mol&#233;culas de adhesi&#243;n</span><p id="par0090" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se determinaron mol&#233;culas de adhesi&#243;n &#40;<span class="elsevierStyleItalic">intercellular adhesion molecule 1</span>&#44; CD54&#47;ICAM-1&#41; tanto en c&#233;lulas THP-1 como en PBMC siguiendo el mismo protocolo&#46;</p><p id="par0095" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las c&#233;lulas se sembraron a una densidad de 10<span class="elsevierStyleSup">6</span> c&#233;lulas&#47;ml en placas de 6 pocillos &#40;Nunclon&#8482; Delta&#44; NUNC&#174; Thermo Fisher Scientific&#44; Waltham&#44; Massachusetts&#44; Estados Unidos&#41;&#46; Se incubaron durante la noche con los distintos LD y utilizando un <span class="elsevierStyleItalic">buffer</span> salino tamponado en fosfato &#40;PBS&#44; Sigma&#44; Sant Louis&#44; Missouri&#44; Estados Unidos&#41; como control&#46; La determinaci&#243;n de mol&#233;culas de adhesi&#243;n se realiz&#243; mediante t&#233;cnicas de inmunofluorescencia utilizando el anticuerpo monoclonal MEM-111 conjugado con FITC frente a la mol&#233;cula CD54&#44; adquirido en Thermo Fisher Scientific &#40;Waltham&#44; Massachusetts&#44; Estados Unidos&#41;&#46; Se utiliz&#243; el cit&#243;metro de flujo FACSCalibur de Becton Dickinson &#40;San Jos&#233;&#44; California&#44; Estados Unidos&#41; y el <span class="elsevierStyleItalic">software</span> Cyflogic para analizar el canal medio de fluorescencia&#46;</p></span><span id="sec0040" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0090">Cuantificaci&#243;n de los niveles de especies reactivas de ox&#237;geno</span><p id="par0100" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La medida de la actividad de las especies reactivas de ox&#237;geno &#40;ROS&#41; se realiz&#243; mediante el m&#233;todo descrito por Wang y Josep &#40;Wang y Joseph&#44; 1999&#41; que se basa en la fluorescencia emitida por la 2&#8242;&#44;7&#8242;diclorodihidrofluoresce&#237;na al oxidarse en 2&#8242;&#44;7¿diclorofluoresce&#237;na&#46;</p><p id="par0105" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las PBMC fueron sembradas en placas de 6 pocillos a una densidad del 10<span class="elsevierStyleSup">6</span> c&#233;lulas&#47;ml&#46; Las c&#233;lulas fueron tratadas con los correspondientes l&#237;quidos durante la noche&#46; Transcurrido este tiempo&#44; las c&#233;lulas se lavaron con soluci&#243;n salina tamponada con fosfato PBS &#40;Sigma&#44; Sant Louis&#44; Missouri&#44; Estados Unidos&#41; y se incubaron a una concentraci&#243;n de 5<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#956;M de H2DCFDA &#40;Thermo Fisher Scientific&#44; Waltham&#44; Massachusetts&#44; Estados Unidos&#41; en medio fresco durante 30&#160;min&#46; El an&#225;lisis se realiz&#243; por citometr&#237;a de flujo FACSCalibur &#40;Becton Dickinson&#41; y se analiz&#243; el canal medio de florescencia con el <span class="elsevierStyleItalic">software</span> Cyflogic&#46;</p></span><span id="sec0045" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0095">Cuantificaci&#243;n de microves&#237;culas</span><p id="par0110" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Las microves&#237;culas se cuantificaron en el sobrenadante recogido del cultivo de las PBMC tratadas con los distintos l&#237;quidos durante la noche&#46; Una al&#237;cuota fue marcada con annexin V conjugada con FITC suministrada por Becton Dickinson&#46; El an&#225;lisis se realiz&#243; mediante citometr&#237;a de flujo FACSCalibur &#40;Becton Dickinson&#41;&#46; Primero se seleccion&#243; la poblaci&#243;n de microves&#237;culas en funci&#243;n del tama&#241;o &#40;FSC&#47;<span class="elsevierStyleItalic">forward scatter</span>&#41; y complejidad &#40;SSC&#47;<span class="elsevierStyleItalic">side scatter</span>&#41; utilizando el kit Flow Cytometry Sub-Micron Size Reference Kit&#44; Green Fluorescent &#40;Life Technologies&#44; Paisley&#44; Estados Unidos&#41; como referencia y&#44; a continuaci&#243;n&#44; se seleccionaron las microves&#237;culas anexina V positivas&#46; Para poder cuantificar la concentraci&#243;n de microves&#237;culas se utiliz&#243; un n&#250;mero conocido de microesferas de l&#225;tex <span class="elsevierStyleItalic">flow count</span> &#40;Beckman Coulter&#44; Brea&#44; California&#44; Estados Unidos&#41;&#46;</p></span><span id="sec0050" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0100">Unidades de los resultados y estad&#237;stica</span><p id="par0115" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Al determinar la expresi&#243;n de mol&#233;culas de adhesi&#243;n&#44; o niveles de ROS en las c&#233;lulas PBMC&#44; se observaron niveles basales muy variables&#44; por lo que decidimos expresar los resultados atribuyendo un valor arbitrario de uno a la muestra control&#44; y determinando el incremento o decremento respecto a este valor cuando las c&#233;lulas eran cultivadas en presencia de los diferentes l&#237;quidos objeto del estudio&#46; Las unidades son tantos por uno o veces el control&#46;</p><p id="par0120" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los resultados se expresan como la media<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>DE de los experimentos&#59; cada uno realizado por triplicado&#46; Se emple&#243; el an&#225;lisis de varianza de un paso para comparar los resultados de los 5 grupos&#44; en cada una de las pruebas&#59; previamente&#44; se realiz&#243; el test de Levene&#46; Si era necesario&#44; se recurri&#243; a una prueba no param&#233;trica&#58; Kruskal-Wallis&#46; Para la comparaci&#243;n entre 2<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>de los grupos entre s&#237; se utiliz&#243; la t de Student pareada o el test de Mann-Whitney&#44; seg&#250;n correspond&#237;a&#46; Se consider&#243; como significativa una p&#160;&#60;&#160;0&#44;05&#46; El an&#225;lisis estad&#237;stico se realiz&#243; con el paquete SPSS 15&#46;0 Inc&#46; &#40;Chicago&#44; Illinois&#44; Estados Unidos&#41;&#46;</p></span></span><span id="sec0055" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0105">Resultados</span><span id="sec0060" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0110">Caracterizaci&#243;n de la activaci&#243;n de la l&#237;nea monocitaria THP-1 inducida por los diferentes l&#237;quidos de di&#225;lisis</span><p id="par0125" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los estudios realizados sobre la expresi&#243;n de la mol&#233;cula de adhesi&#243;n &#40;ICAM-1&#41; en la l&#237;nea celular monocitaria THP-1 mostraron que los LD que conten&#237;an acetato &#40;L3 y L4&#41; indujeron un incremento en la densidad de expresi&#243;n de ICAM-1 en las c&#233;lulas THP-1 &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0005">fig&#46; 1</a>&#41;&#46; El canal medio de fluorescencia para la mol&#233;cula mostr&#243; un incremento de 2&#44;61<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;79 y 2&#44;97<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;81 veces&#44; respectivamente&#44; para L3 y L4 respecto a la densidad media observada en las c&#233;lulas control &#40;1<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;11&#41;&#46; Por el contrario&#44; los l&#237;quidos que conten&#237;an citrato &#40;L1 y L2&#41; no modificaron la expresi&#243;n de ICAM-1 en c&#233;lulas THP-1 &#40;canal medio de fluorescencia de 0&#44;73<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;27 y 0&#44;86<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;23&#44; respectivamente para L1 y L2&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="fig0005"></elsevierMultimedia></span><span id="sec0065" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0115">Activaci&#243;n de c&#233;lulas inmunocompetentes de sujetos sanos</span><p id="par0130" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Como puede observarse en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0010">figura 2</a>&#44; en la expresi&#243;n de ICAM-1&#44; no se observaron diferencias significativas respecto al control cuando las c&#233;lulas fueron cultivadas con los diferentes l&#237;quidos&#46; Sin embargo&#44; al comparar la expresi&#243;n en c&#233;lulas cultivadas con l&#237;quidos que conten&#237;an citrato &#40;L1 y L2&#41; y la de los l&#237;quidos que conten&#237;an solo acetato &#40;L3 y L4&#41;&#44; s&#237; observamos un incremento en la expresi&#243;n de ICAM-1 inducida por los l&#237;quidos con acetato&#46;</p><elsevierMultimedia ident="fig0010"></elsevierMultimedia><p id="par0135" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El estudio de la expresi&#243;n de ROS como indicador de estr&#233;s oxidativo revel&#243; que los l&#237;quidos con acetato indujeron mayor actividad que los l&#237;quidos que conten&#237;an citrato&#46; Como se puede ver en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0010">figura 2</a>&#44; los l&#237;quidos L3 y L4 indujeron una actividad significativamente mayor de ROS en PBMC vs&#46; control &#40;p&#160;&#60;&#160;0&#44;05&#41;&#44; y en las c&#233;lulas tratadas con L1 y L2 &#40;p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;05&#41;&#46;</p><p id="par0140" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Al igual que ocurr&#237;a en las determinaciones de ROS&#44; los l&#237;quidos L3 y L4 indujeron un incremento en la producci&#243;n de microves&#237;culas &#40;&#916;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleMonospace">&#61;</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>2&#44;73<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;62 y 2&#44;84<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;59&#44; respectivamente&#44; respecto al control&#44; p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;01&#41; &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0015">fig&#46; 3</a>&#41;&#46; Sin embargo&#44; no se observaron diferencias en las c&#233;lulas cultivadas con los l&#237;quidos L1 y L2 &#40;&#916;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span><span class="elsevierStyleMonospace">&#61;</span><span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;94<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;233 y 1&#44;19<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;31&#44; respectivamente&#44; respecto al control&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="fig0015"></elsevierMultimedia></span><span id="sec0070" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0120">Activaci&#243;n de c&#233;lulas inmunocompetentes de sujetos con insuficiencia renal cr&#243;nica</span><p id="par0145" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Encontramos un paralelismo entre lo observado en las c&#233;lulas de sujetos sanos y lo observado en las c&#233;lulas de enfermos en lo referente a expresi&#243;n de ROS&#44; o producci&#243;n de microves&#237;culas&#46; Como se recoge en la <a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0020">figura 4</a>&#44; al igual que ocurr&#237;a en las c&#233;lulas de sujetos sanos&#44; los l&#237;quidos que conten&#237;an acetato indujeron mayor actividad ROS &#40;p&#160;&#60;&#160;0&#44;005&#44; vs&#46; control y c&#233;lulas tratadas con L1 y L2&#41;&#59; o en la producci&#243;n de microves&#237;culas &#40;<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#fig0015">fig&#46; 3</a>&#41;&#46; Mientras que el incremento en el n&#250;mero de microves&#237;culas con L1 y L2 fue de 0&#44;16<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;61 y 0&#44;21<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;48&#44; respectivamente&#44; respecto al control &#40;ns&#41;&#44; con L3 y L4 se observ&#243; un incremento de 1&#44;73<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;46 y 1&#44;82<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#177;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;29 &#40;p<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#60;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>0&#44;05&#41;&#46;</p><elsevierMultimedia ident="fig0020"></elsevierMultimedia></span></span><span id="sec0075" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0125">Discusi&#243;n</span><p id="par0150" class="elsevierStylePara elsevierViewall">En este estudio <span class="elsevierStyleItalic">in vitro</span> el acetato&#44; en concentraciones de 3 y 4<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L en el LD&#44; induce en las c&#233;lulas inmunocompetentes de la sangre un aumento de ICAM-1&#44; ROS y microves&#237;culas circulantes&#46; El citrato no induce esa respuesta inflamatoria&#46;</p><p id="par0155" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Entre un 50 y un 60&#37; de los pacientes en HD presentan un estado de inflamaci&#243;n cr&#243;nica de bajo grado&#44; que se ha relacionado con la desnutrici&#243;n&#44; amiloidosis&#44; ateroesclerosis&#44; susceptibilidad a las infecciones y con la elevada morbimortalidad de estos pacientes<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0235"><span class="elsevierStyleSup">19&#44;20</span></a>&#46; Esta situaci&#243;n inflamatoria cr&#243;nica es multifactorial&#58; en parte se debe a la uremia y en parte a factores propios de la t&#233;cnica de di&#225;lisis<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0245"><span class="elsevierStyleSup">21-23</span></a>&#46; Entre los factores proinflamatorios propios de la HD est&#225; la presencia de acetato en el LD en una concentraci&#243;n de 20 a 40 veces superiror a la del plasma&#46; La transferencia de acetato al paciente durante la HD se ha asociado a aumento del estr&#233;s oxidativo&#44; de las citocinas proinflamatorias y de la s&#237;ntesis de &#243;xido n&#237;trico<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0160"><span class="elsevierStyleSup">4-8</span></a>&#46; Durante la sesi&#243;n de HD hay otros factores proinflamatorios&#44; como la membrana del dializador&#44; las l&#237;neas&#44; endotoxinas y otras sustancias pirog&#233;nicas&#44; que hacen dif&#237;cil valorar el papel de uno de ellos individualmente&#44; como es el caso del acetato&#46; Por ello&#44; se ha recurrido a un experimento <span class="elsevierStyleItalic">in vitro</span> para dilucidar ese efecto proinflamatorio&#46;</p><p id="par0160" class="elsevierStylePara elsevierViewall">La inducci&#243;n de inflamaci&#243;n del acetato del LD no depende solo del tipo de mol&#233;cula&#44; sino de su concentraci&#243;n&#46; El acetato es una mol&#233;cula fisiol&#243;gica&#58; ser&#237;a su concentraci&#243;n entre 30 y 40 veces superior a la normal lo que provocar&#237;a la respuesta inflamatoria&#46; Por el contrario&#44; el citrato&#44; aunque tambi&#233;n est&#225; en concentraciones muy elevadas&#44; no provoca ese efecto&#46; Las concentraciones de una y otra mol&#233;cula no son arbitrarias ni f&#225;cilmente modificables&#46; Son las necesarias para estabilizar el LD y para contribuir al balance &#225;cido-base adecuado durante la HD&#46; En este estudio hemos utilizado las concentraciones habituales en el LD&#46;</p><p id="par0165" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Como primera aproximaci&#243;n experimental para determinar una posible actividad diferencial de los LD sobre c&#233;lulas inmunocompetentes&#44; determinamos la expresi&#243;n de ICAM-1 en la l&#237;nea celular monocitaria THP-1&#46; Esta l&#237;nea ha sido utilizada habitualmente como modelo en estudios de da&#241;o vascular inducido asociado a la actividad inflamatoria y&#44; m&#225;s concretamente&#44; los cambios en la expresi&#243;n de ICAM-1 en estas c&#233;lulas se han considerado un reflejo de las modificaciones que sufren las c&#233;lulas de estirpe monocitaria para favorecer su interacci&#243;n con el endotelio vascular<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0260"><span class="elsevierStyleSup">24</span></a>&#46; Los LD con acetato incrementaron la expresi&#243;n de ICAM-1 respecto a los controles&#44; mientras que los LD con citrato no lo hicieron&#46;</p><p id="par0170" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Dado que los LD que contienen acetato hab&#237;an inducido activaci&#243;n en c&#233;lulas THP-1&#44; quisimos comprobar si este efecto era debido a alguna caracter&#237;stica espec&#237;fica que mostrasen las c&#233;lulas transformadas&#44; por lo que decidimos cultivar PBMC de sujetos sin enfermedad previa conocida con los diferentes LD&#44; incluyendo en este estudio otros biomarcadores asociados a activaci&#243;n celular que pudiesen ser de inter&#233;s cl&#237;nico como elementos de ayuda al diagn&#243;stico para determinar la activaci&#243;n celular inducida por LD&#46; En sangre de sujetos sanos no encontramos diferencias en cuanto a la expresi&#243;n de ICAM-1 con los LD con acetato respecto al control&#44; pero s&#237; respecto a los LD con citrato&#46; En el estudio de ROS se observ&#243; que los LD con acetato indujeron mayor actividad que el control y que los LD que conten&#237;an citrato&#46; Junto a la determinaci&#243;n de marcadores asociados a activaci&#243;n celular&#44; decidimos incluir en este estudio la determinaci&#243;n de microves&#237;culas totales producidas por los PBMC&#44; dada la relevancia se&#241;alada en los &#250;ltimos a&#241;os para estas estructuras en la etiopatogenia de diferentes enfermedades&#44; incluidas las enfermedades cardiovasculares desarrolladas en un entorno de respuesta inflamatoria alterada<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0265"><span class="elsevierStyleSup">25</span></a>&#46; Al igual que ocurr&#237;a en las determinaciones de ROS&#44; los LD con acetato indujeron un incremento de la producci&#243;n de microves&#237;culas&#46;</p><p id="par0175" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El proceso de inflamaci&#243;n cr&#243;nica de los pacientes con ERC se suele asociar a la presencia de c&#233;lulas inmunocompetentes activadas en sangre perif&#233;rica&#46; En este estudio&#44; hemos confirmado este hecho y&#44; comparadas con las c&#233;lulas de los sujetos control&#44; en las de pacientes con ERC observamos mayor densidad de expresi&#243;n de ICAM-1 o de niveles basales de ROS &#40;datos no aportados&#41;&#46;</p><p id="par0180" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Cuando comparamos la expresi&#243;n de los diferentes marcadores de activaci&#243;n celular&#44; a diferencia de lo observado en c&#233;lulas de sujetos control&#44; la expresi&#243;n de ICAM-1 no se modific&#243; con ninguno de los LD&#46; Aunque no se ha podido determinar de forma precisa esta diferencia&#44; una posible explicaci&#243;n viene asociada a la observaci&#243;n descrita anteriormente&#58; al estar las c&#233;lulas activadas&#44; la expresi&#243;n de esta mol&#233;cula es tan alta que no se puede producir un aumento de su densidad de expresi&#243;n ante un nuevo est&#237;mulo&#46;</p><p id="par0185" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Se ha descrito un efecto inhibitorio directo del citrato sobre la activaci&#243;n de los granulocitos&#44; contrarrestando la adherencia inducida por el leucotrieno-B4 e interfiriendo con su activaci&#243;n<a class="elsevierStyleCrossRefs" href="#bib0270"><span class="elsevierStyleSup">26&#44;27</span></a>&#46; Tambi&#233;n la activaci&#243;n del complemento estar&#237;a reducida&#44; incluso en concentraciones de 0&#44;25<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>mmol&#47;L de citrato<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0205"><span class="elsevierStyleSup">13</span></a>&#46; Estos efectos antiinflamatorios del citrato vendr&#237;an condicionados por la concentraci&#243;n de calcio&#44; por lo que podr&#237;an depender de la concentraci&#243;n de calcio en el LD&#46; Alguno de nuestros resultados avalan este papel beneficioso del citrato&#44; que se a&#241;ade al de la eliminaci&#243;n del acetato&#44; aunque este &#250;ltimo ser&#237;a el fundamental&#46;</p><p id="par0190" class="elsevierStylePara elsevierViewall">El estudio tiene limitaciones como el peque&#241;o n&#250;mero de controles sanos y la limitada informaci&#243;n de la situaci&#243;n de las c&#233;lulas de los pacientes en HD&#46; Al comparar el efecto de los 5 grupos en las mismas c&#233;lulas&#44; disminuye el efecto negativo de esa limitaci&#243;n&#46; La diferente composici&#243;n de los LD respecto a algunos electr&#243;litos es muy peque&#241;a&#44; pero no se puede excluir que tenga alg&#250;n efecto&#46;</p><p id="par0195" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Podemos concluir que el acetato en el LD&#44; en las concentraciones que se utilizan habitualmente en la pr&#225;ctica cl&#237;nica&#44; aumenta el estr&#233;s oxidativo y las microves&#237;culas totales&#44; y puede actuar como coadyuvante de los otros est&#237;mulos proinflamatorios a los que est&#225;n sometidos los pacientes ur&#233;micos en HD&#46; Los LD con citrato no producen esta activaci&#243;n&#44; por lo que podr&#237;an ser una alternativa en la cl&#237;nica&#46; El objetivo deber&#237;a ser eliminar al m&#225;ximo todos los elementos de la HD bioincompatibles&#44; como lo es el acetato en estas concentraciones&#46; Esto tendr&#237;a especial inter&#233;s en los pacientes mayores de 70 a&#241;os en HD&#44; generalmente metabolizadores m&#225;s lentos de acetato&#46; En estos&#44; la eliminaci&#243;n del acetato en el LD podr&#237;a contribuir a una mejor supervivencia independientemente de sus comorbilidades<a class="elsevierStyleCrossRef" href="#bib0280"><span class="elsevierStyleSup">28</span></a>&#46;</p></span><span id="sec0080" class="elsevierStyleSection elsevierViewall"><span class="elsevierStyleSectionTitle" id="sect0130">Conflicto de intereses</span><p id="par0200" class="elsevierStylePara elsevierViewall">Los autores declaran no tener ning&#250;n conflicto de intereses&#46;</p></span></span>"
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                  \t\t\t\t" class=""><thead title="thead"><tr title="table-row"><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">F&#243;rmula&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Referencia&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Na&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Ca&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Mg&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">K&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Cl&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Citrato&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Acetato&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Bicarbonato&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Glucosa&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th><th class="td" title="table-head  " align="left" valign="top" scope="col" style="border-bottom: 2px solid black">Osmolaridad&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</th></tr></thead><tbody title="tbody"><tr title="table-row"><td class="td" title="table-entry  " align="" valign="top">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="" valign="top">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">mM&#47;L&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">mM&#47;L&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">mM&#47;L&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="" valign="top">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">mM&#47;L&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">mM&#47;L&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">mM&#47;L&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">mM&#47;L&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">mM&#47;L&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">mOsm&#47;L&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">LD1 Citrato Gambro&#174;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">CX 265 G&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">140&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">1&#44;65&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">0&#44;5&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">2&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">109&#44;3&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">1&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">0&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">34&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">8&#44;33&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="" valign="top">&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">LD 2 Citrasate&#174;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">303-C &#40;A<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>&#43;<span class="elsevierStyleHsp" style=""></span>B&#41;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">139&#44;3&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">1&#44;665&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">0&#44;475&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">1&#44;9&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">104&#44;37&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">0&#44;8&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">0&#44;3&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">35&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">8&#44;33&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">287&#44;22&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">LD 3 Acetato Gambro&#174;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">G295&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">140&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">1&#44;5&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">0&#44;5&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">2&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">109&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">0&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">3&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">35&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">8&#44;33&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">294&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td></tr><tr title="table-row"><td class="td-with-role" title="table-entry ; entry_with_role_rowhead " align="left" valign="top">LD 4 Acetato FMC&#174;&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
                  \t\t\t\t</td><td class="td" title="table-entry  " align="left" valign="top">ACF 3A5&nbsp;\t\t\t\t\t\t\n
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Información del artículo

ISSN: 02116995
Idioma original: Español

DOI:10.1016/j.nefro.2017.03.024

Datos actualizados diariamente

año/Mes	Html	Pdf	Total

2024 Noviembre	5	6	11
2024 Octubre	99	39	138
2024 Septiembre	103	22	125
2024 Agosto	117	63	180
2024 Julio	125	26	151
2024 Junio	146	53	199
2024 Mayo	135	33	168
2024 Abril	106	39	145
2024 Marzo	132	26	158
2024 Febrero	93	44	137
2024 Enero	91	25	116
2023 Diciembre	59	21	80
2023 Noviembre	99	47	146
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2023 Septiembre	102	50	152
2023 Agosto	82	19	101
2023 Julio	110	45	155
2023 Junio	118	39	157
2023 Mayo	120	61	181
2023 Abril	86	25	111
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2023 Enero	105	47	152
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2022 Julio	120	60	180
2022 Junio	130	68	198
2022 Mayo	163	41	204
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2021 Noviembre	189	55	244
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2021 Mayo	102	67	169
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2021 Marzo	94	61	155
2021 Febrero	86	64	150
2021 Enero	60	37	97
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2019 Octubre	210	41	251
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2019 Agosto	124	37	161
2019 Julio	113	18	131
2019 Junio	96	41	137
2019 Mayo	122	28	150
2019 Abril	139	49	188
2019 Marzo	100	43	143
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2019 Enero	54	26	80
2018 Diciembre	173	59	232
2018 Noviembre	287	22	309
2018 Octubre	194	19	213
2018 Septiembre	90	15	105
2018 Agosto	71	26	97
2018 Julio	57	17	74
2018 Junio	89	18	107
2018 Mayo	87	14	101
2018 Abril	84	13	97
2018 Marzo	70	11	81
2018 Febrero	65	6	71
2018 Enero	56	12	68
2017 Diciembre	106	13	119
2017 Noviembre	158	17	175

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